Relatório espectrofotometria B15, Trabalhos de Química Analítica

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UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA

KELIANE SÃO PEDRO P. DE SOUZA

Relatório - Determinação de ácido ascórbico

em sucos de frutas

Salvador - Bahia

INTRODUÇÃO

Os espectrofotômetros são instrumentos de análise que permitem: i) Selecionar o

comprimento de onda (, lâmbda) da radiação adequado à análise de um determinado

componente ii) Medir a intensidade I do feixe emergente que corresponde a um

determinado feixe incidente Io, convertendo o sinal recebido no detector em medida de

absorbância (ou absorvância) para o comprimento de onda da análise. iii)Determinar a

concentração de uma espécie em solução a partir do gráfico da variação de absorbância (ou

transmitância) em função da concentração de várias soluções-padrão.

A Espectrofotometria de absorção molecular na região espectral do UV-vis é uma das

técnicas espectroscópicas mais utilizadas em química analítica, e faz parte da classe dos

métodos analíticos que se baseiam na interação da matéria com a energia radiante. A região

ultravioleta próxima do espectro é geralmente considerada de 200 a 400 nm, e a região do

visível de 400 a 800 nm. A técnica se baseia na medição indireta da luz absorvida por

espécies químicas moleculares com grupos cromóforos relevantes, em geral em solução. A

transmitância é a fração de radiação incidente transmitida pelo meio.

Um espectro de absorção é um gráfico da absorbância versus o comprimento de onda,

como ilustrado nos gráficos desse relatório. A absorbância pode também ser apresentada

em forma de gráfico contra o número de onda ou a frequência. Muitos espectrofotômetros

modernos de varredura produzem os espectros de absorbância diretamente.

“A absorbância é diretamente proporcional a concentração da solução de amostra.”

Log(P/P0) = εbc

A = εbc

Onde:

A: é a absorbância,

ε: é a absortividade molar

b: é o caminho óptico

Quando dispomos de aparelhos capazes de medir a intensidade da luz transmitida pelas

soluções (espectrofotômetros) podemos determinar a concentração da solução

desconhecida pela aplicação da lei de Lambert-Beer que correlaciona a intensidade da luz

transmitida com a concentração do soluto na amostra.

Tabela 3: Relação de soluções e Reagentes

Identificação Grau de Pureza Concentração Quantidade

Fe(III) P.A 1000mg/L 80μL

Ácido ascórbico P.A 100mg/L 500 μL

Ácido ascórbico P.A 10mg/L 500 μL

Ortofenantrolina

P.A

0,1% (m/v)

600 μL

Tampão de ác acético/

acetato de sódio

pH 4,25 1 mol/L 2mL

Água ultrapura - 10mL

BrPADAP P.A 0,020% (m/v) 1mL

EDTA P.A 0,10% (m/v) 1mL

FLUXOGRAMAS

1 - Complexo [Fe(phen) 3

]

2+

CÁLCULOS

Para a construção dos gráficos absorbância x comprimento de onda, foram utilizados os

dados previamente disponibilizados de comprimento de onda e porcentagem da

transmitância no excel. Para encontrar a absorbância foi necessário primeiro encontrar T,

que é a transmitância (%) / 100. Como indicado a baixo absorbância é o log(T), em outra

coluna no excel foi utilizado o - logT para encontrar absorbância para poder contruir o

gráfico.

RESULTADOS E DISCUSSÕES

1 - Complexo [Fe(phen) 3

]

2+

λ (nm) Transmitância (%) T Absorbância

Pode-se observar que o maior pico, λmax, para absorbância vs comprimento de onda, foi

por volta de 510nm, deste modo, pode-se entender que o complexo absorve nesse

comprimento de onda, e emite uma cor correspondente que cai dentro do visível. Observa-

se que a transmitância é inversamente proporcional a absorbância.

2 - Complexo [Fe(Br-PADAP) 2

]

2+

λ

(nm)

Transmitância (%) T Absorbância

400 450 500 550 600 650 700

Absorbância

Comprimento de onda (λ)

Absorbância

Transmitância

1 - Complexo [Fe(phen) 3

]

2+

Concentração

(mg/L) Absorbância

Para feitura da curva de calibração absorbância x concentração, foram utilizados 7 pontos, com a

concentração de ácido ascórbico 0,0 – 6,0 mg/L e absorbância com valores entre 0,024 á 0,732, o R

2

encontrado foi de 0,9986, valor que se aproxima do ideal que seria 1

A linearidade corresponde à capacidade do método em fornecer resultados diretamente

proporcionais à concentração da substância de interesse, dentro de um determinado intervalo de

concentrações onde o método será aplicado. Após descrever a equação da reta formada pelo gráfico

da medida observada versus concentração, pode-se avaliar a linearidade pelo valor coeficiente de

regressão “a”, o intercepto “b” e o coeficiente de determinação “R” o recomendado é um R >0,99.

Avaliação realizada com amostra de Limão (n=10)

Identificação Absorvância (A)

média 0.

desvio-padrão 0.

c.v (%) 0.

A precisão é o grau de concordância mútua entre dados que foram obtidos da mesma forma. A

precisão fornece uma medida do erro aleatório ou indeterminado em uma análise. As figuras de

mérito da precisão incluem o média, desvio padrão, o coeficiente de variação.

Média:

Para encontrar o desvio padrão utiliza-se a seguinte formula:

Coeficiente de variação:

Observa-se que o valor do desvio padrão é de 0,001, logo um valor baixo, que indica que os valores

de Absorbância encontrados são próximos entre si, ou seja, com uma boa precisão.

Limite de detecção e quantificação

Branco Absorbância (A)

Desvio padrão 0.

LD (mg/L) 0.

LQ (mg/L) 0.

Limite de detecção (LD): é uma mínima concentração ou massa do analito que pode ser

detectado em torno de um nível de confiança conhecido. Branco mais três vezes o desvio

padrão do branco (ruído). (LD = 3.3 σ / b1)

Limite de quantificação (LQ): É a concentração mais baixa na qual medidas quantitativas

podem ser feitas. O Mais baixo LQ é geralmente considerado ser igual a dez vezes o desvio

padrão de medidas repetidas do branco. (LQ = 10 σ / b1)

encontrado foi um valor baixo, pode-se concluir que houve exatidão pelo método de

espectrofotometria.

2 - Complexo [Fe(Br-PADAP) 2

]

2+

Concentração

(mg/L) Absorbância

Para feitura da curva de calibração absorbância x concentração, foram utilizados 8 pontos, com a

concentração de ácido ascórbico 0,0 – 1,2 mg/L e absorbância com valores entre 0, 123 a 0, 651 , o R

2

encontrado foi de 0,99 61 , valor que se aproxima do ideal que seria 1.

Avaliação realizada com amostra de Melão (n=10)

Identificação Absorvância (A)

média 0.

desvio padrão 0.

c.v (%) 0.

Nesse complexo o desvio padrão também é 0,001 e c.v (%) 0,002 indicando uma boa

precisão entre os valores de absorbância encontrados.

y = 0.4529x + 0.

R² = 0.

0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.

Absorbância

Concentração (mg/L)

Limite de detecção e quantificação

Branco Absorbância (A)

Desvio padrão 0.

LD (mg/L) 0.

LQ (mg/L) 0.

Concentração das amostras

Amostra

massa

(g) Absorbância

Concentração

(mg/L)

Concentração

real

(mg/100g) média

Desvio

padrão

IC

(95%) média ± IC

Melão

Melancia

Observa-se na tabela que o melão foi encontrado menores concentrações em relação a

melancia, enquanto o do melão ficou entre 8.81 – 9 .15 e a melancia em 5.56 – 5. 72. Com

um intervalo de confiança para os ambos de 95%, para o melão 9.03 ± 0.47 e para a melancia

de 5.67 ± 0.23.