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Roteiro aula pratica, Notas de aula de Biomedicina

Roteiro de aula prática em Laboratório para o Curso de Análises Clínicas

Tipologia: Notas de aula

2012

Compartilhado em 17/11/2012

janaina-leao-7
janaina-leao-7 🇧🇷

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RESIDÊNCIA SAÚDE
CURSO: ANÁLISES CLÍNICAS
TUTOR(A): JANAINA LEAO
DISCIPLINA: IMUNOLOGIA E TÉCNICAS INSTRUMENTAIS II
AULA 01
Roteiro de aula prática
TESTE DE VDRL- TESTE NÃO- TREPÔNEMICO
INTRODUÇÃO
O Treponema pallidum, agente causador da sífilis, induz o organismo a formar dois tipos de
anticorpos, os não treponêmicos ou reaginas (inespecíficos) e os treponêmicos (específicos).
O teste VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) desenvolvido por Harris, Rosenberg e
Riedel na década de 40 é capaz de detectar anticorpos inespecíficos reaginas, presentes no
soro de pacientes com infecção sifilítica, o que permite seu emprego em larga escala como
prova de triagem sorológica para sífilis.
PRINCIPIO DO TESTE
VDRL: teste não treponêmico, utiliza como antígeno a cardiolipina que normalmente ocorre
no soro em níveis baixos e apresenta-se elevado na sífilis. O VDRL é uma reação de
floculação, apresentando alta sensibilidade e baixa especificidade. Torna-se positivo duas
semanas após o cancro. Falso-negativos podem ocorrer na sífilis tardia. Entre 1 e 40% dos
resultados de VDRL são falso-positivos: idosos, portadores de doenças auto-imunes, malaria,
mononucleose, brucelose, hanseníase, hepatites, portadores HIV, leptospirose, viciados em
drogas, outras infecções bacterianas, vacinações e gravidez. Falso-positivos mostram títulos
em geral ate 1:4, mas títulos maiores podem ser encontrados. Na avaliação do tratamento
observa-se que na sífilis primaria e secundaria, os títulos caem cerca de quatro vezes em três
meses e oito vezes em seis meses, ficando negativos em um a dois anos. Resultados positivos
de VDRL no líquor são encontrados em 50% a 60% dos casos de neurosífilis, com
especificidade em torno de 99%. Apos tratamento, títulos caem entre três e seis meses,
podendo demorar anos para negativarem. Linfocitose e aumento das proteínas são evidencias
de neurosifilis ativa.
MATERIAL:
Placas de Kline
Microscópio
Pipetas semiautomáticas de 50 µl
Ponteiras amarelas
Palitos de plastico
Cronômetro
Estantes/grades
AMOSTRA:
Amostras de pacientes soro positivo e soro negativo
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RESIDÊNCIA SAÚDE

CURSO: ANÁLISES CLÍNICAS

TUTOR(A): JANAINA LEAO

DISCIPLINA: IMUNOLOGIA E TÉCNICAS INSTRUMENTAIS II

AULA 01

Roteiro de aula prática

TESTE DE VDRL- TESTE NÃO- TREPÔNEMICO

INTRODUÇÃO

O Treponema pallidum , agente causador da sífilis, induz o organismo a formar dois tipos de anticorpos, os não treponêmicos ou reaginas ( inespecíficos ) e os treponêmicos ( específicos ). O teste VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) desenvolvido por Harris, Rosenberg e Riedel na década de 40 é capaz de detectar anticorpos inespecíficos reaginas, presentes no soro de pacientes com infecção sifilítica, o que permite seu emprego em larga escala como prova de triagem sorológica para sífilis.

PRINCIPIO DO TESTE

VDRL: teste não treponêmico, utiliza como antígeno a cardiolipina que normalmente ocorre no soro em níveis baixos e apresenta-se elevado na sífilis. O VDRL é uma reação de floculação, apresentando alta sensibilidade e baixa especificidade. Torna-se positivo duas semanas após o cancro. Falso-negativos podem ocorrer na sífilis tardia. Entre 1 e 40% dos resultados de VDRL são falso-positivos: idosos, portadores de doenças auto-imunes, malaria, mononucleose, brucelose, hanseníase, hepatites, portadores HIV, leptospirose, viciados em drogas, outras infecções bacterianas, vacinações e gravidez. Falso-positivos mostram títulos em geral ate 1:4, mas títulos maiores podem ser encontrados. Na avaliação do tratamento observa-se que na sífilis primaria e secundaria, os títulos caem cerca de quatro vezes em três meses e oito vezes em seis meses, ficando negativos em um a dois anos. Resultados positivos de VDRL no líquor são encontrados em 50% a 60% dos casos de neurosífilis, com especificidade em torno de 99%. Apos tratamento, títulos caem entre três e seis meses, podendo demorar anos para negativarem. Linfocitose e aumento das proteínas são evidencias de neurosifilis ativa.

MATERIAL:

  • Placas de Kline
  • Microscópio
  • Pipetas semiautomáticas de 50 μl
  • Ponteiras amarelas
  • Palitos de plastico
  • Cronômetro
  • Estantes/grades

AMOSTRA:

  • Amostras de pacientes soro positivo e soro negativo

REAGENTES:

  • Kit de VDRL (Wiener)
  • Solução de salina (0,9 %)

PROCEDIMENTOS:

  • Realizar sempre em paralelo os controles posi�vos e nega�vos;
  • Numerar a placa escavada denominando controle (CP), controle nega�vo (CN), e teste (T);
  • Transferir 50μl dos soros controles posi�vo e nega�vo respec�vamente, para as duas primeiras cavidades da placa Kline;
  • Transferir 50μl da amostra a ser inves�gada na cavidade denominada de T;
  • Adicionar 25 μl do an�geno de VDRL, em todas as cavidades;
  • (^) Agitar imediatamente a placa no agitador de Kline por 4 minutos a 180 rpm
  • Proceder a leitura, imediatamente, em microscópio com obje�va de 10x, iniciando sempre pelos controles posi�vos e nega�vos;

RESULTADOS ESPERADOS:

  • Se houver formação de flocos grosseiros – teste reagente
  • Se não houver formação de flocos ou grumos- teste não-reagente.

Para Testes- reagentes, deve-se realizar a diluição para determinação do fator:

  • Adiciona-se no primeiro poço (cavidade) 50 μl de soro do paciente (puro);
  • E no segundo poço 50 μl de soro + 50 μl de salina;
  • Para os seguintes poços, adiciona-se 50 μl de salina e + 50 μl da solução anterior.

RECOMENDAÇÕES E ORIENTAÇÕES

Cada aluno é responsável pelo seus EPI’s (Equipamento de Proteção Individual)

EPI’s

  • Jaleco
  • Máscara
  • Luvas
  • Gorro

Orientações

  • Evitar uso de jóias (anéis, brincos longos e acessários);

permitem determinar o grupo sanguíneo dos indivíduos, identificar a presença de antígenos no sangue e avaliar a compatibilidade entre o sangue de dois indivíduos. Existem substâncias na superfície das hemácias chamadas antígenos , que são produzidas de acordo com a hereditariedade recebida através os genes. Um antígeno é uma substância capaz de estimular o organismo humano a produzir anticorpos. Em condições normais, um organismo não produz anticorpos contra os seus próprios antígenos. Os antígenos da superfície das hemácias ao se encontrarem com os anticorpos correspondentes, produzem aglutinação celular. Por essa razão, os antígenos dos eritrócitos são também chamados de aglutinógenos e a combinação dos antígenos de um indivíduo com os anticorpos de outro indivíduo indica que os dois indivíduos possuem tipos sanguíneos incompatíveis. Quando nos referimos a tipo sanguíneo , estamos na realidade nos referindo a duas características: o grupo sanguíneo do sistema ABO e á presença ou ausência do fator Rh. O fator Rh presente caracteriza o grupo Rh+ (Rh positivo), enquanto a sua ausência caracteriza o grupo Rh- (Rh negativo).

MATERIAL:

  • Placas brancas;
  • Tubos de hemólise;
  • Centrífuga
  • Pipetas semiautomáticas de 20 μl, 50 μl e 1 mL;
  • Estantes/grades;
  • (^) Bastões de plasticos.

AMOSTRA:

  • Sangue com anticoagulante EDTA

REAGENTES:

  • kits de soros Anti-A, Anti-B e Anti- D;
  • Solução de salina (0,9%).

PROCEDIMENTOS:

  • Tipagem em tubo
  • Tipagem em placa
  • Limpe bem uma lâmina ou superfície branca com álcool 70% e deixe-a secar.
  • 2- Escreva sobre a lâmina as indicações para os anticorpos anti-A, anti-B e anti-D (escreva próximo à borda e com espaçamento entre cada anotação).
  • 3- Pressione um dos dedos da mão, da base para a ponta, de modo que o fluxo sangüíneo se concentre na extremidade, ou mesmo uso o sangue total com anticoagulante EDTA, usando 20 μl de sangue para cada gota de reagente.
  • 4- Desinfete a ponta do dedo com álcool 70% e perfure-a com uma lanceta estéril.
  • 5- Pingue uma gota do soro desejado no local indicado da lâmina e, logo após, uma gota de sangue sobre o soro.
  • 6- Homogeneíze bem com palito de plastico (ATENÇÃO: Uma ponta de palito para cada tipo de Soro e pessoa!).
  • 7- Observe, por até 2 minutos, se houve aglutinação e conclua o seu tipo sangüíneo para os sistemas ABO e Rh.

RESULTADOS ESPERADOS:

Aglutinou A = Tipo A

Aglutinou B = Tipo B

Aglutinou A e B = Tipo AB

Aglutinou D = Fator Rh Positivo

Não algutinou D = Fator Rh Negativo