Universidade Tecnológica Federal do Paraná
Campus Campo Mourão
Disciplina de Microbiologia dos Alimentos
Profa. Leila Larisa M. Marques
PESQUISA DE Salmonella – parte 2
PROVAS BIOQUÍMICAS
Baseia-se na evidenciação das propriedades
fisiológicas e metabólicas das culturas
suspeitas, por meio da verificação da presença
de urease; fermentação de açúcares no meio
TSI; descarboxilação da lisina; produção de
H2S; motilidade e produção de indol, etc.
Todas as provas bioquímicas serão feitas a
partir do ágar não seletivo (ágar nutriente).
1. Prova da Oxidase
Método: Usando palitos de madeira, de
plástico descartáveis ou pipetas Pasteur,
estéreis, ou alça de platina, realizar a prova de
oxidase espalhando a cultura sobre papel filtro
impregnado com o reativo para oxidase, ou
sobre tiras de papel para teste de Oxidase,
disponíveis comercialmente.
Fazer a leitura em 10 a 20 segundos. Após esse
tempo, podem ocorrer reações falso-positivas.
Resultado: O aparecimento de cor azul
(N'N'N'N'-tetrametil-parafenileno-diamina) ou
vermelho intenso (oxalato de para-amino-
dimetilanilina) é indicativo de reação positiva.
Obs.: Não utilizar alças de níquel-cromo ou
alças de aço para realizar a prova de oxidase,
pois traços de óxido de ferro na superfície
flambada podem produzir reação falso-positiva.
2. Prova da Urease
Princípio: determinar a habilidade de um
determinado microrganismo em degradar,
enzimaticamente, a uréia pela urease, com a
formação de duas moléculas de amônia.
A alteração da cor amarela (original do meio)
para rosa intenso do meio é indicativa de
alcalinização do meio devido à formação de
amônia. A visualização da cor é promovida pelo
vermelho de fenol, adicionado ao meio.
Método: semear maciçamente em caldo ou ágar
uréia. Incubar a 36ºC por 18 a 24 horas.
Resultado: 99% das Salmonellas não produzem
urease (cor do meio continua amarelo ou rosa
bem claro).
3. Descarboxilação da lisina
Princípio: determinar a habilidade enzimática de
um determinado microrganismo em
descarboxilar o aminoácido lisina, com a
consequente alcalinização do meio de cultivo,
pela presença da enzima lisina descarboxilase.
A visualização da cor é promovida pelo
indicador púpura de bromocresol, que tem cor
violeta em pH alcalino.
Método: Inocular com picada profunda o ágar
LIA (lisina-ferro), estriando na superfície
inclinada do bisel. Adicionar selo estéril
(vaselina), visando evitar o contato do meio com
o ar e o consequente aparecimento de uma
falsa alcalinização na superfície do meio por
degração aeróbia do substrato protéico. Incubar
a 36 ºC por 24 a 30 horas.
Resultado: a maioria (96%) das salmonelas é
capaz de produzir a lisina descarboxilase. O
meio passa de amarelo para violeta e produzem
H2S.
4. Meio SIM ( Indol Sulfeto Motilidade)
Princípio: verificação da motilidade dos
microrganismos, da capacidade de produção de
H2S e de indol.
Método: inocular com picada, o meio de cultura
SIM. Incubar a 36ºC por 24 a 30 horas. Após a
leitura da motilidade e da produção de H2S,
adicionar algumas gotas de reativo de Kovac’s
aos tubos para verificar se houve a produção de
indol (anel vermelho).
Resultado: a motilidade é caracterizada pela
difusão do crescimento por todo o meio. Se for
restrito à linha de semeadura, indica que o
microrganismo é imóvel.
A maioria das Salmonelas produz H2S, são
móveis e não produzem indol (não forma anel
vermelho).
