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Ficha técnica, medio selectivo y diferencial para el cultivo y aislamiento de Staphylococcus.
Tipo: Apuntes
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Agar Estafilococos No. 110 es un medio selectivo y diferencial para el cultivo y aislamiento de Staphylococcus.
Stone sugirió que la actividad de la gelatinasa es indicativo de microorganismos contaminantes en alimentos. Posteriormente Chapman, Lieb y Curcio reportaron que las cepas típicas de Estafilococos patógenos fermentan el manitol, producen pigmento y licuan la gelatina. Chapman utilizó esas propiedades para desarrollar un medio selectivo y diferencial llamado Agar Estafilococos No. 110. Este medio también es utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos en base a la fermentación de manitol, la formación de pigmento y la hidrólisis de gelatina. En este medio la peptona provee la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el extracto de levadura proporciona vitaminas del complejo B, la alta concentración de cloruro de sodio tiene efecto en el desarrollo selectivo de los Estafilococos. La lactosa y el D-manitol, son los hidratos de carbono fermentables. La fermentación del manitol produce ácidos y la adición de azul de bromotimol revela colonias bacterianas de color amarillo. La gelatina es el sustrato para la enzima gelatinasa, los Estafilococos coagulasa positivo resisten altas concentraciones de NaCl. El agar es usado como agente solidificante.
Gelatina bacteriológica 30.0 g Lactosa 2.0 g Extracto de levadura 2.5 g D-manitol 10.0 g Digerido pancreático de caseína 10.0 g Cloruro de Sodio 75.0 g Fosfato dipotásico 5.0 g pH 7.0 ± 0.2 a 2 Agar Bacteriológico °C 15.0 g 5
Método Suspender 149.0 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de presión) durante 15 minutos. Enfriar a una temperatura entre 45-50 °C y vaciar en placas de Petri estériles. Procedimiento
La reacción y fermentación típica se describe en la siguiente tabla: MICROORGANISMOS ATCC CRECIMIENTO PIGMENTO GELATINASA MANITOL INOCULO cfu/mL % DE RECUPERACIÓN Staphylococcus aureus 25923 bueno Amarillo + + ≤ 100 ≥ 80% Staphylococcus epidermidis 12228 Bueno Blanco a crema + - ≤ 100 ≥ 80% Enterococcus faecalis 29212 Inhibición total N/A N/A N/A 104 - 106 - Eschreichia coli 25922 Inhibición total N/A N/A N/A 104 - 106 - Proteus vulgaris 8427 Inhibición parcial N/A N/A N/A 104 - 106 ≤ 25%