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Agar Estafilococos No. 110, Apuntes de Microbiología

Ficha técnica, medio selectivo y diferencial para el cultivo y aislamiento de Staphylococcus.

Tipo: Apuntes

2019/2020
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Subido el 18/11/2020

geraldine-cacace
geraldine-cacace 🇦🇷

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Agar Estafilococos No. 110
USO
Agar Estafilococos No. 110 es un medio selectivo y diferencial para el cultivo y aislamiento de Staphylococcus.
EXPLICACIÓN
Stone sugirió que la actividad de la gelatinasa es indicativo de microorganismos contaminantes en alimentos.
Posteriormente Chapman, Lieb y Curcio reportaron que las cepas típicas de Estafilococos patógenos fermentan el
manitol, producen pigmento y licuan la gelatina. Chapman utilizó esas propiedades para desarrollar un medio
selectivo y diferencial llamado Agar Estafilococos No. 110. Este medio también es utilizado para el aislamiento y
diferenciación de estafilococos en base a la fermentación de manitol, la formación de pigmento y la hidrólisis de
gelatina.
En este medio la peptona provee la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el extracto de levadura
proporciona vitaminas del complejo B, la alta concentración de cloruro de sodio tiene efecto en el desarrollo
selectivo de los Estafilococos. La lactosa y el D-manitol, son los hidratos de carbono fermentables.
La fermentación del manitol produce ácidos y la adición de azul de bromotimol revela colonias bacterianas de color
amarillo. La gelatina es el sustrato para la enzima gelatinasa, los Estafilococos coagulasa positivo resisten altas
concentraciones de NaCl. El agar es usado como agente solidificante.
FÓRMULA POR LITRO
Gelatina bacteriológica 30.0 g
Lactosa
2.0 g
Extracto de levadura 2.5 g
D-manitol
10.0 g
Digerido pancreático de caseína 10.0 g
Cloruro de Sodio
75.0 g
Fosfato dipotásico 5.0 g
pH 7.0 ± 0.2 a 2
Agar Bacteriológico
°C
15.0 g
5
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Agar Estafilococos No. 110

USO

Agar Estafilococos No. 110 es un medio selectivo y diferencial para el cultivo y aislamiento de Staphylococcus.

EXPLICACIÓN

Stone sugirió que la actividad de la gelatinasa es indicativo de microorganismos contaminantes en alimentos. Posteriormente Chapman, Lieb y Curcio reportaron que las cepas típicas de Estafilococos patógenos fermentan el manitol, producen pigmento y licuan la gelatina. Chapman utilizó esas propiedades para desarrollar un medio selectivo y diferencial llamado Agar Estafilococos No. 110. Este medio también es utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos en base a la fermentación de manitol, la formación de pigmento y la hidrólisis de gelatina. En este medio la peptona provee la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el extracto de levadura proporciona vitaminas del complejo B, la alta concentración de cloruro de sodio tiene efecto en el desarrollo selectivo de los Estafilococos. La lactosa y el D-manitol, son los hidratos de carbono fermentables. La fermentación del manitol produce ácidos y la adición de azul de bromotimol revela colonias bacterianas de color amarillo. La gelatina es el sustrato para la enzima gelatinasa, los Estafilococos coagulasa positivo resisten altas concentraciones de NaCl. El agar es usado como agente solidificante.

FÓRMULA POR LITRO

Gelatina bacteriológica 30.0 g Lactosa 2.0 g Extracto de levadura 2.5 g D-manitol 10.0 g Digerido pancreático de caseína 10.0 g Cloruro de Sodio 75.0 g Fosfato dipotásico 5.0 g pH 7.0 ± 0.2 a 2 Agar Bacteriológico °C 15.0 g 5

PREPARACIÓN

Método Suspender 149.0 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de presión) durante 15 minutos. Enfriar a una temperatura entre 45-50 °C y vaciar en placas de Petri estériles. Procedimiento

  1. Sembrar las muestras de acuerdo a los procedimientos establecidos e incubarlas a 35 + 2°C durante 24 a 48 horas.
  2. Para observar la fermentación del manitol, adicionar 1 gota de indicador de azul de bromotimol al 0.04% en el lugar donde previamente se ha tomado una colonia.
  3. Para la prueba de la reacción de la gelatinada, adicionar 5 mL de una solución saturada de sulfato de amonio, incubar las placas a 35 + 2°C durante 10 minutos. Una zona clara alrededor de la colonia indica hidrólisis de la gelatina.

CARACTERÍSTICAS

La reacción y fermentación típica se describe en la siguiente tabla: MICROORGANISMOS ATCC CRECIMIENTO PIGMENTO GELATINASA MANITOL INOCULO cfu/mL % DE RECUPERACIÓN Staphylococcus aureus 25923 bueno Amarillo + + ≤ 100 ≥ 80% Staphylococcus epidermidis 12228 Bueno Blanco a crema + - ≤ 100 ≥ 80% Enterococcus faecalis 29212 Inhibición total N/A N/A N/A 104 - 106 - Eschreichia coli 25922 Inhibición total N/A N/A N/A 104 - 106 - Proteus vulgaris 8427 Inhibición parcial N/A N/A N/A 104 - 106 ≤ 25%