TÉCNICAS DE ANÁLISIS BIOQUÍMICO I CURSO 2011-12
AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN
Electroforesis
33.- Durante el proceso de aislamiento de una enzima, se ha efectuado un análisis en SDS-PAGE
en condiciones reductoras. El resultado es el de la figura (en el carril de la izquierda se han
aplicado patrones cuya masas moleculares son 10, 15, 20, 25, 37, y 50 KDa). Comente los
resultados obtenidos.
34.- Los resultados de una PAGE-SDS se resumen a continuación (M, kDa; d, distancia migrada
en el gel, en cm): citocromo c (M=12.4, d=8.65), lisozima (M=14.3, d=7.90), mioglobina (M=17.8,
d=6.90), -lactoglobulina (M=18.4, d=6.90), tripsinógeno (M=24.0, d=5.40), anhidrasa carbónica
(M=29.0, d=5.00), glutaraldehido-3-fosfato deshidrogenada (M=36.0, d=3.80), ovalbúmina
(M=45.0, d=3.20), albúmina de suero bovino (M=66.0, d=1.25) y transferrina (M=78.0, d=0.60)
¿Cuál es la M de una proteína cuyo d, en esa electroforesis, es 4.50?
35.- En la figura aparece el resultado de una
electrotransferencia de una PAGE-SDS de una
proteína tratada con 2-mercaptoetanol (1) y sin
dicho tratamiento. Comente los resultados
obtenidos.
36.- En la figura se recoge el resultado de una
electroforesis bidimensional (electroenfoque +
SDS-PAGE) de las proteínas del virus de la gripe.
Determine las características moleculares de la
proteína que aparece en el círculo.
37.- En la figura se muestra la foto de una
electroforesis en geles de agarosa al 1%
en la que se han resuelto distintos
fragmento de DNA de hebra doble
(pocillos 1-4). En el pocillo 5 aparece el resultado de aplicar un patrón que contiene
fragmentos de masa molecular conocida: 10000bp, 6000bp, 4000bp, 3000bp, 2000bp
y 1000bp. A la vista del resultado, calcule el tamaño, en términos de pares de bases,
de los fragmentos observados en los cuatro primeros pocillos.
38.- En la parte A de la
figura se muestra un gel
de poliacrilamida teñido con bromuro de etidio
relativo a un ensayo de actividad ribonucleolítica
de una toxina (carril 6) y de cinco mutantes
(carriles 1 a 5) sobre un 35-mer oligo-
ribonucleotido. En la parte B aparece un gel de
agarosa, teñido también con bromuro de etidio,
en el que se han analizado las mezclas de
reacción de las seis proteínas anteriores con un
lisado de reticulocitos de conejo, libre de células.
El carril 6 corresponde a la toxina silvestre, y el carril 7 a la mezcla de reacción obtenida para RNasa U2.
Comente los resultados obtenidos.