Prácticas de Biología Celular
Biología Celular e Histología
•Cultivos celulares y Procesamiento de tejidos.
•Suspensiones celulares.
•Inmunodetección directa.
•Identificación celular tras cultivo.
•Manejo del microscopio óptico.
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practicas presentacion dos, Ejercicios de Biología Celular
Asignatura: Biología celular e histología (grado), Profesor: Yasmina Juarranz, Carrera: Biología, Universidad: UCM
Tipo: Ejercicios
2014/2015
1 / 14
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Biología Celular e Histología Prácticas de Biología Celular
•^ Cultivos celulares y Procesamiento de tejidos. •^ Suspensiones celulares. •^ Inmunodetección directa. •^ Identificación celular tras cultivo. •^ Manejo del microscopio óptico.
RESUMEN DE LAS PRÁCTICAS
Práctica 1
:^ Introducción a los cultivos celulares y al procesamiento de tejidos. •Tinciones.•Cultivo de una línea celular de astrocitos (para inmunodetectar vimentina).•Preparación de tampón PBS. Práctica 2: Suspensión celular de bazo: disgregación mecánica, separaciónde células adherentes y preparaciones por CTC. •Obtener una suspensión celular de bazo.•Determinar viabilidad mediante Azul Tripán.•Cálculo del porcentaje de adherencia.•Realizar preparaciones por Citocentrifugación (CTC). Práctica 3: Inmunodetección directa. •Inmunodetección directa en las obtenidas en la práctica 2.•Determinar el porcentaje de células adherentes de la práctica 2. Práctica 4: Inmunodetección indirecta. •Inmunodetección diferencial de filamentos intermedios (vimentina) en las célulascrecidas en portaobjetos de la práctica 1.•Contratinción con Azul de Toluidina. Práctica 5: Manejo del microscopio óptico •Observación e interpretación de las preparaciones realizadas.
Hilio
ZonaMarginal
Trabécula
Arteriolas
PulpaRoja
PulpaBlanca
Cápsula externa
PALS
Corte esquemático de bazo
Estructura del bazo.
Técnicas a utilizar.^ Homogenización de tejidos: consiste en la disgregación del tejido a analizarpara obtener una suspensión celular.Tipos:• Mecánica (bisturí, tijeras, aguja, potter, malla, etc.)• Química (EDTA, EGTA, etc.)• Enzimática (tripsina, pepsina, pronasa, etc.)^ Técnica empleada en nuestro caso:^ Malla
Émbolo
Bazo
Placa Petri + RPMI 2% suero
Densidad celular: existen varias formas de calcular el número de células deuna suspensión celular.• Automatizada (citómetro, contador electrónico, etc.)• Manual (hemocitómetros). El más común es el de Neubauer.
Cámara de Neubauer
Seccióntransversal
Cubreobjetos
( )
Profundidad = 0.1 mm Muestra A B C
D
En nuestro caso: - Contaremos 16 cuadrados detipo B.- Repartidos en las 4 diagonalesindicadas.Nº cél/ml = Cél. contadas x 10000
Técnica empleada en nuestro caso:
Cél. muertaCél. viable
Calculamos: % Cél. viables
Aislamiento celular: se define como la separación de un tipo celular a partir deuna población mixta.Generalmente se emplean anticuerpos específicos que reconocen una poblacióncelular concreta en función de los antígenos que expresa.Este aislamiento se puede realizar mediante citrometría de flujo, si los anticuerposestán conjugados a un fluorocromo (empleando un
sorter^ o separador celular),
o bien mediante aislamiento magnético, si el anticuerpo está conjugado conmicrobolas férricas.
Aislamiento por adherencia a placa:
Incubar a 37ºC
Calculamos:^ % Célulasadheridas
Sobrenadante Nº conocidode células
Citocentrifugación: técnica empleada para la realización de tincionesinmunohistoquímicas en células en suspensión. Consiste en la centrifugación depequeñas alícuotas de células sobre portaobjetos para que queden adheridasformando una monocapa, que permita su estudio posterior.Se emplean adaptadores y rotores especiales, como los que se muestran.