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Simulador de cinética enzimatica, Monografías, Ensayos de Bioquímica

Las enzimas son proteínas que actúan como catalizador para acelerar las reacciones químicas.

Tipo: Monografías, Ensayos

2018/2019

Subido el 05/09/2019

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PRACTICA #10
SIMULADOR DE CINÉTICA ENZIMÁTICA
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
ESPINOZA ALANIS FERNANDA IVETTE
MARCO TEORICO
Una enzima es una proteína que actúa como catalizador de una reacción química
acelerándola. Las enzimas son protagonistas fundamentales en los procesos del
metabolismo celular. Las enzimas unen su sustrato en el centro reactivo o catalítico, que suele
estar protegido del agua para evitar interacciones no deseadas. Tienen una enorme variedad
de funciones dentro de la célula: degradan azúcares, sintetizan grasas y aminoácidos, copian
fielmente la información genética, participan en el reconocimiento y transmisión de señales
del exterior y se encargan de degradar subproductos tóxicos para la célula, entre muchas
otras funciones vitales. El porcentaje de saturación son los centros activos ocupados.
El mecanismo de acción sigue los siguientes pasos:
1. En primer lugar, se forma un complejo: enzima-sustrato.
2. En segundo lugar, el sustrato y, la coenzima si fuera necesaria, se unen al centro activo de
la enzima. En el centro activo, se encuentran restos terminales de aminoácidos que
establecen interacciones químicas con el sustrato; estas interacciones son las responsables
de la transformación, ya que producen reordenamientos de los electrones, que debilitan
ciertos enlaces y favorecen la formación de otros, desencadenando la transformación
bioquímica.
3. Por último, los productos de la reacción se separan del centro activo, y la enzima se
recupera intacta para nuevas catálisis.
La cinética de Michaelis-Menten describe la velocidad de reacción de muchas reacciones
enzimáticas. Recibe este nombre en honor a Leonor Michaelis y Maude Menten.
La cinética enzimática es la disciplina que estudia la velocidad en las reacciones químicas en
las que intervienen enzimas. El estudio de esta velocidad y de la dinámica de la enzima, nos
permite conocer a fondo el mecanismo de acción de dicha enzima, el rol que cumple en el
metabolismo, y la regulación de su actividad por inhibidores naturales, fármacos, venenos u
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PRACTICA

SIMULADOR DE CINÉTICA ENZIMÁTICA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

ESPINOZA ALANIS FERNANDA IVETTE

MARCO TEORICO

Una enzima es una proteína que actúa como catalizador de una reacción química acelerándola. Las enzimas son protagonistas fundamentales en los procesos del metabolismo celular. Las enzimas unen su sustrato en el centro reactivo o catalítico, que suele estar protegido del agua para evitar interacciones no deseadas. Tienen una enorme variedad de funciones dentro de la célula: degradan azúcares, sintetizan grasas y aminoácidos, copian fielmente la información genética, participan en el reconocimiento y transmisión de señales del exterior y se encargan de degradar subproductos tóxicos para la célula, entre muchas otras funciones vitales. El porcentaje de saturación son los centros activos ocupados. El mecanismo de acción sigue los siguientes pasos:

  1. En primer lugar, se forma un complejo: enzima-sustrato.
  2. En segundo lugar, el sustrato y, la coenzima si fuera necesaria, se unen al centro activo de la enzima. En el centro activo, se encuentran restos terminales de aminoácidos que establecen interacciones químicas con el sustrato; estas interacciones son las responsables de la transformación, ya que producen reordenamientos de los electrones, que debilitan ciertos enlaces y favorecen la formación de otros, desencadenando la transformación bioquímica.
  3. Por último, los productos de la reacción se separan del centro activo, y la enzima se recupera intacta para nuevas catálisis. La cinética de Michaelis-Menten describe la velocidad de reacción de muchas reacciones enzimáticas. Recibe este nombre en honor a Leonor Michaelis y Maude Menten. La cinética enzimática es la disciplina que estudia la velocidad en las reacciones químicas en las que intervienen enzimas. El estudio de esta velocidad y de la dinámica de la enzima, nos permite conocer a fondo el mecanismo de acción de dicha enzima, el rol que cumple en el metabolismo, y la regulación de su actividad por inhibidores naturales, fármacos, venenos u

otro tipo de sustancias. La medida se realiza siempre en las condiciones óptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reacción observada es la velocidad máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparición de los productos o la desaparición de los reactivos.

  • La Km nos da una idea la afinidad que tiene el enzima por su sustrato, cuanto mayor es Km menor es la afinidad (predominan las formas E y S libres), cuanto menor es Km mayor es la afinidad (predomina la forma ES).
  • La velocidad máxima Vmáx estima el número de centros activos del enzima. Recordar que hemos definido la Vmáx como la velocidad que obtendríamos cuando todo el enzima se encuentra unido al sustrato. A la constante k2 (poder catalítico del enzima) se la reconoce con el nombre de número de recambio, es el número de moléculas de sustrato convertidas en producto por unidad de tiempo. OBJETIVO Que el alumno comprenda la relación de la constante de Michaelis-Menten y velocidad máxima de una reacción enzimática. METODOLOGIA

IV. a) Se regenera el grupo carboxilo del péptido, separándose la serina y quedando así libre el otro fragmento peptídico (la parte R′ con extremo carboxilo libre) b) La serina recupera el protón a costa de la histidina, que a su vez lo capta del aspártico. c) Se ha regenerado la tríada catalítica (Asp, His, Ser) en su estado original. SIMULACION DE LA UNION DE UN SUSTRATO A UNA ENZIMA Fig2. Simulación simple de la cantidad de moléculas de enzima que fijan sustrato, en función de la concentración de éste. ENSAYO DE ACTIVIDAD ENZIMATICA Se ilustra un ejemplo de ensayo para medir la actividad de una enzima y es posible explorar cómo dicha actividad varía dependiendo de las condiciones del medio en el que se encuentra (pH y temperatura). Fig3. Con un pH de 5 a 10 y una temperatura de 45ºC. El pH 9 es el ideal para que la enzima produzca mayor cantidad de producto porque trabaja con materiales alcalinos.

Fig4. Se ilustra lo mismo que lo anterior con un pH de 9 y con una temperatura de 35ºC a 70ºC variando en 5ºC. El ph9 temperatura 50ºC es una temperatura adecuada da más producto y pH 9 temperatura 35ºC menos adecuado por que ya hay una saturación de producto, o temperatura 65,70ºC. ANALISIS DEL GRAFICO DE LA CINETICA DE MICHAELIS-MENTEN Fig5. Interpretación gráfica de los parámetros Km y Vmáx, EFECTO DE LA CONCENTRACION DE SUSTRATO Fig6. Valor de Km menor a 10 DISCUSION

  1. Investiga el pH y temperatura ideal para la acción de la enzima 6- O - α-L-ramnosil-D- glucosidasa, de Actinoplanes missouriensis y compara tus resultados obtenidos. R= Esta posee un pH y una temperatura óptima 6.0 y 55 °C. Comparando observamos que cambio en el pH que en la temperatura.
  2. El diseño de tu experimento del efecto de concentración de sustrato permitió la determinación de la Km y de la velocidad máxima. ¿Se obtuvo la curva que se esperaba?, ¿Por qué?