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PROBLEMAS DE INHIBICIÓN
1. Se estudia la cinética de una enzima en ausencia y presencia de un inhibidor A, a una concentración 10 mM. La velocidad inicial viene dada en función de la concentración de sustrato. Los datos obtenidos son:
[S] (mM) V (mM min-^1 ) Sin inhibidor Inhibidor A 1.25 1.72 0. 1.67 2.04 1. 2.50 2.63 1. 5.00 3.33 1. 10.00 4.17 2.
a. Determina Vmax y KS en ausencia y presencia del inhibidor b. ¿Qué tipo de inhibición se produce?
c. Calcula la constante de disociación (Ki) de la reacción de inhibición.
Solución: Graficar 1/v versus 1[S]
Sin inhibición
- 13 mM/ min
- 1951
V max = (^) b = =
K (^) S = V max * (m ) = 5. 13 * 0. 4843 = 2. 48 mM
Con inhibición
- 97 mM/ min
- 3369
´max =^ = = b
V app
KSapp = V max app * ( m) = 2. 97 * 0. 8582 = 2. 55 mM
Comaprando:
y = 0.4843x + 0.
y = 0.8582x + 0.
0
1
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
1/Vo 1/Vi
1/v
1/[S]
1/Vmax KM/Vmax
-1/KM
V V^ app max > max app K (^) S ≈ KS
Por lo tanto es una INHIBICIÓN NO-COMPETITIVA
[ ]
75 mM 1
97 mM/min
13 mM/min
10 mM
1 max
max
app
I
V
V
I
K
2. En un experimento se midió la tasa inicial de una reacción enzimática, v , a varias concentraciones de substrato [S]****. La concentración de la enzima es 10 nM. Se graficó 1/ v versus 1/[S] y se observó una línea recta en la cual el intercepto- y es 0.005 nM-1^ seg y la pendiente es 200 seg. ¿Cuál es el valor de KM y el de Vmax para esta reacción enzimática? ¿Cuál es el valor de kcat para esta enzima? ¿Determine el coeficiente de especificidad? 30 μμμμ M de un inhibidor, E, es adicionado y se observó que el intercepto- y es 0.0065 nM-1^ seg y la pendiente es 260 seg. ¿Qué tipo de inhibición se observó? ¿Cuál es el valor de Ki para el inhibidor con esta enzima?
Solución: Se observa que se utilizó la ecuación de Lineweaver-Burk
max^ [ ]^ max
V S V
K
v
=^ M^ +
Los datos del problema son: m = 200 s b = 0.005 s nM-
1 max (^0). 005 200
V = = ⋅ nM ⋅ s
K (^) M = 200 ∗ V max= 200 ∗ 200 = 40 , 000 ⋅ nM
Sabemos que Vmax = kcat [ E ]t, por lo tanto
[ ]
1
1 max (^20) 10
= = s nM
nM s E
V
k t
cat
El coeficiente de especificidad es:
1 1
1
- 0005 40 , 000
= = s nM nM
s K
k
M
α cat
En presencia del inhibidor tenemos m = 260 s b = 0.0065 s nM-
