Sico - cromatografia, Notas de estudo de Bioquímica

Baixe Sico - cromatografia e outras Notas de estudo em PDF para Bioquímica, somente na Docsity!

CENTRO PAULA SOUZA

Etc. Conselheiro Antônio Prado – ETECAP

Ensino Técnico em Bioquímica

Jennifer Nonato

Sabrina Costa

Juliano Abdallah

Cromatografia em: Papel, Camada Delgada (CCD) e Coluna

Disciplina: SICO

Prof.º Bianchi

Campinas

Introdução

A cromatografia é uma técnica de separação baseada na distribuição dos componentes de uma mistura entre um fluido (fase móvel ou eluente) e um adsorvente (fase estacionária). A fase estacionária pode ser um sólido ou um líquido depositado num sólido inerte, empacotado numa coluna ou espalhado por uma superfície formando uma camada fina.

Em papel:

Esta técnica é assim chamada porque utiliza para a separação e identificação das substâncias ou componentes da mistura a migração diferencial sobre a superfície de um papel de filtro de qualidade especial (fase estacionária). A fase móvel pode ser um solvente puro ou uma mistura de solventes. Este método é muito útil para separar substâncias muito polares, como açúcares e aminoácidos. Possui o inconveniente de poder-se cromatografar poucas quantidades de substância de cada vez.

Em camada delgada:

Técnica muito semelhante à cromatografia em papel, entretanto exige uma suplementar separação em placa. Esta placa é um suporte liso, geralmente vidro, revestido com substância em pó aderente, ou aderida através de aglutinante conveniente. O revestimento deve ser tão uniforme quanto possível para permitir separações limpas e reproduzíveis. As partículas utilizadas para revestir a placa devem possuir um tamanho uniforme. A separação dos componentes da amostra é realizada pela técnica ascendente e revelada. A fase ligada ou quimicamente ligada é preparada reagindo alguns grupos hidroxílicos que se encontram na superfície do sólido, normalmente sílica, com hidrocarbonetos insaturados por duplas ligações somente ou substituídos.

• Observar

Em coluna:

• Adaptar uma coluna no suporte universal e colocar o eluente (etanol) e retirar o ar da torneira
• Introduzir um pequeno chumaço de algodão no estreitamento da coluna para evitar a saída do adsorvente
• Preparar uma suspensão de sílica-gel e eluente
• Transferir suspensão para coluna contendo cerca de 1/3 de FM *A adição deve ser lenta e contínua para garantir uma homogeneização
• Colocar 1 ml da mistura a ser eluida na coluna com o auxilio de uma pipeta, deixando escorrer pela parede da coluna
• Adicionar cuidadosamente a FM ate que se forma uma coluna liquida incolor acima do nível da mistura
• Eluir a FM pela coluna ate que o 1° componente saia completamente da coluna

Resultados

Em papel

Quando os aminoácidos foram aquecidos em solução contendo excesso de ninidrina, produziram um composto de coloração púrpura, conhecido como Púrpura de Rüehmann.

Em camada delgada:

Incolor: amostra de refrigerante diet Coloridas: amostra de refrigerante comum e sacarose

Em coluna:

A solução se divide por completo evidenciando duas soluções diferentes, seja em cor, características, etc.

Questões

2. A reação da ninidrina é usada na detecção de aminoácidos por ser característica da

função amina primária. A ninidrina é um poderoso agente oxidante que reage com -

aminoácidos, entre pH 4 e 8, originando um composto púrpura, que não apresenta

sempre a mesma intensidade de coloração. Os aminoácidos prolina e hidroxiprolina

são exceções, pois apresentam coloração amarela.

3. Próxima pagina:

Lisina Leucina

Glicina

4. Formulas estruturais: