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Cuaderno de prácticas de Bioquímica de segundo de Biología en la UAM
Tipo: Ejercicios
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Alumno: Determinación cuantitativa de proteínas: Método de Lowry Representar la recta patrón de BSA (Valores de absorbancia frente a concentración de BSA). 0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 0
f(x) = 0 x − 0 R² = 1
Concentración de BSA (μg/mL) Absorbancia
Completar la tabla con los datos de absorbancia obtenidos y calcular la concentración de las muestras por interpolación en la recta de BSA. Columna1 Absorbancia (DO 750 nm) Conc. Diluida Conc. Sin diluir Media Tubo 9 0,088 55,75 8362,5 11325, Tubo 10 0,075 47,63 14287, Tubo 11 0,211 132,63 265,3 294, Tubo 12 0,128 80,75 323, Tubo 13 0,068 43,25 1297,5 915, Tubo 14 0,013 8,88 532, Tubo 15 0,043 27,63 828,8 549, Tubo 16 0,006 4,50 270, Columna 1 Absorbancia (DO 750 nm) Concentración de BSA Tubo 1 0 0 Tubo 2 0,020 20 Tubo 3 0,083 40 Tubo 4 0,114 80 Tubo 5 0,261 160 Tubo 6 0,372 240 Tubo 7 0,479 320 Tubo 8 0,650 400
Realizar una curva de titulación, representando los valores de pH en el eje de ordenadas (eje Y) y en el eje de abscisas (eje X) la relación de moles de anión hidroxilo (OH-) por mol de aminoácido inicial (mol OH/mol aa). A partir de dicha curva determinar gráficamente los valores de pKa para cada grupo ionizable. De acuerdo con la tabla de valores de pKa, averiguar qué aminoácido se ha titulado. Nuestro aminoácido era el marcado con la letra F, que se corresponde con la cisteína. Formular las especies moleculares mayoritarias presentes en cada tramo de la curva de titulación. Calcular el punto isoeléctrico del aminoácido problema. 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4. 0 2 4 6 8 10 12 14
Moles OH-/Moles aa pH Actividad butirilcolinesterasa de suero de caballo
Representar gráficamente los nanomoles de Butirilcolina hidrolizados frente a Unidades de butirilcolinesterasa empleadas en cada ensayo. El valor obtenido en el Blanco deberá restarse a todos los demás valores, ya que indica la descomposición espontánea, no catalizada enzimáticamente, del sustrato de la reacción. Columna 1 Absorción restando el blanco Unidades de butirilcolineterasa Nanomoles de Butirilcolina Blanco 0 0 0 Tubo 1 0,117 0,05 34, Tubo 2 0,203 0,10 60 Tubo 3 304 0,15 88 Tubo 4 0,405 0,20 120 Tubo 5 0,557 0,25 163, 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0. 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
U de BuChEasa Nanomoles de Butirilcolina (nmol)
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
Concentración (mM) Velocidad (nmol/min) Calcular los valores de Km y Vmáx a partir de una representación de inversos. -6 -4 -2 0 2 4 6 8 10 0
f(x) = 0.01 x + 0. R² = 0.
1/[ ] (mM-1) 1/v0 (min/mol)
