Provas bioquímicas para identificação de bacilos gram-negativos
Esta aula tem como objetivo a identificação de enterobactérias em
gêneros ou espécies, através da utilização de meios de cultura especiais que
possibilitam a verificação da presença de enzimas bacterianas relacionadas
ao metabolismo de vários substratos. As alterações nos meios produzidas
pelo metabolismo bacteriano servirão de base para sua identificação de
acordo com o esquema a seguir:
1) PLAQUEAMENTO SELETIVO
É a etapa de isolamento bacteriano a partir do espécime clínico,
utilizando meios seletivo-indicadores como o Agar EMB. A presença dos
corantes eosina amarela e azul de metileno inibem as bactérias Gram
positivas. Ao prepararmos este meio, a eosina e o azul de metileno
reagem e formam o eosinato de azul de metileno (sal). As bactérias Gram
negativas que fermentam lactose (LAC+) e, consequentemente,
produzem ácidos que dissociam este sal, apresentando-se como colônias
rosa-avermelhadas com ou sem um centro negro, devido ao azul de
metileno, enquanto as não fermentadoras (LAC-) formam colônias
transparentes.
2) CONFIRMAÇÃO BIOQUÍMICA
É um conjunto de provas bioquímicas necessárias para a identificação
das colônias suspeitas. Serão utilizados os meios abaixo. Estes meios
totalizam oito testes que somados ao da fermentação da lactose permitem
identificar com fidelidade a grande maioria das enterobactérias isoladas em
espécimens clínicos.
A) Meio EPM
O meio EPM contém os testes de fermentação e produção de gás a partir
de glicose, produção de H 2S, hidrólise da uréia e desaminação de
triptofano.
B) Meio MILi
O Meio MILi contém os testes de motilidade, indol e descarboxilação de
lisina.
C) Citrato de Simons
Este teste permite identificar espécies que utilizam citrato como única
fonte de carbono.
2.1) Fundamento teórico:
•Hídrólise da uréia: Este teste verifica a habilidade de um
microrganismo em utilizar a uréia, formando duas moléculas de
amônia pela ação da enzima urease (uréia F 0
A E 2 NH3 + CO2 + H2O).
•Motilidade: O teste visa verificar se a bactéria é móvel ou imóvel.
Logo pode ajudar na diferenciação de alguns gêneros como por
exemplo Enterobacter (usualmente +) e Klebsiella (-). A mobilidade
das bactérias é proporcionada pela presença de um ou mais flagelos.
As bactérias imóveis não possuem flagelos.
•Produção de indol: Este teste tem como princípio determinar a
habilidade de um microrganismo em produzir indol a partir da
