Instituto de Química – UNESP – Araraquara
Licenciatura em Química
Cromatografia em papel e Eletroforese
Giovana Cristina da Silva
Gabriela Hernandez
Tais Ribeiro da Silva
Araraquara
2019
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Cromatografia e eletroforese, calculo de coeficiente de retenção e determinação dos aminoácidos presentes na amostra
Tipologia: Notas de estudo
2019
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Instituto de Química – UNESP – Araraquara
Licenciatura em Química
Cromatografia em papel e Eletroforese
Giovana Cristina da Silva
Gabriela Hernandez
Tais Ribeiro da Silva
Araraquara
Objetivo
Estudar duas técnicas de separação de aminoácidos que, quando usadas em conjunto, a análise de seus resultados podem levar a identificação de aminoácidos presentes em uma amostra de composição desconhecida.
Cromatografia em papel
A cromatografia em papel é uma técnica na qual é possível fazer a separação de aminoácidos tanto em função da polaridade da sua cadeia lateral, como também pelo peso molecular que o mesmo apresenta.
Para realização do experimento foram aplicadas diferentes soluções de aminoácidos em papel, juntamente com uma solução de composição desconhecida como mostrado na Figura 1
Como solvente, utilizou-se uma solução de butanol: Ácido Acético: H 2 O (4:1:5). Todas as substâncias utilizadas como solvente tem por características um momento magnético diferente de zero, ou seja, são moléculas polares. Para explicar o que ocorre, pode-se usar como base as estruturas de cada aminoácido:
Figura 1 - Preparo do papel
Resultado da Cromatografia
Através dos valores de Rf calculados das manchas do cromatograma, observa-se que pode haver na amostra X os seguintes aminoácidos: Leucina, Valina e Tirosina, o que pode ser comprovado observando-se o cromatograma.
Figura 2 - Resultado do cromatograma, indicando que os aminoácidos presentes na amostra são Valina, Leucina e Tirosina Eletroforese
A eletroforese permite a separação de aminoácidos em determinado valor de pH em função do ponto isoelétrico apresentado por cada um. Ou seja, dependendo do pH usado no experimento, o aminoácido apresentará uma carga positiva ou negativa, sendo atraído para o respectivo polo de carga oposta. Depois de revelada a solução com ninidrina, é possível descobrir a composição de uma amostra desconhecida.
O experimento foi realizado em dois meios diferentes. O primeiro era um meio levemente acidificado (pH = 6), enquanto na segunda situação tinha-se um meio básico (pH = 10). As amostras foram aplicadas no papel conforme esquematizado a seguir:
Figura 4 - Preparação da eletroforese em pH = 6 Figura 3 - Preparação da eletrofose pH = 10
Depois de aplicada as diferentes amostras e feita a eletrólise, obteve-se o seguinte resultado:
Tendo em vista os resultados revelados com solução de ninidrina, bem como do ponto isoelétrico de cada aminoácido, é possível analisar os possíveis aminoácidos presentes na amostra de interesse X.
Tabela 2: Ponto isoelétrico de alguns aminoácidos
Aminoácido Ponto Isoelétrico Glu 3, Tyr 5, Leu 5, Lys 9, Val 5, His 7, Arg 10,
Para a eletroforese realizada em meio de pH = 6 (levemente acidificado), o único aminoácido capaz de ser diferenciado é o ácido glutâmico. Como o meio encontra-se em um valor de pH maior que o seu ponto isoelétrico, o aminoácido apresentará uma carga negativa em sua cadeia, sendo atraído para o polo positivo da eletroforese.