Eletroforese, Notas de estudo de Biologia

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Eletroforese

Consiste na migração e separação de particulas em uma matriz, submetidas a uma diferença de potencial elétrico. As matrizes podem ser:

• Gel de Agarose
• Gel de Poliacrilamida
• Gel Bidimensional
• Acetato de Celulose
• Papel Filtro A migração depende do tamanho e carga, além da DDP a que foram submetidas.

Princípio

A amostra é inserida nos “pocinhos”

-^ + -^ **+

Partículas menores ou com cargas mais negativas são ‘mais rapidas’** Corrente elétrica

Interlactantes

Laranja de acridina (a)

Brometo de etídio (a)

Nitrato de prata (p)

Azul de comassiee (p)

O Procedimento

 (^) É utilizado uma cuba horizontal ligada a uma fonte de energia  (^) Uma solução tampão é adicionada à cuba para manter estáveis as condições de pH do meio, onde depois é fundida o gel  (^) Após a resfriação aplica-se as amostras no gel e é iniciada a Eletroforese.

Gel de Poliacrilamida (SDS)

 A poliacrilamida é uma mistura de

dois polímeros, acrilamida e bisacrilamida;

Utilizada para observação de fragmentos

menores (poucos pares de bases ou proteínas)

Melhor resolução do que a eletroforese em gel

de agarose

Neurotóxica!

SDS ou Dodecilsulfato de Sódio

é um detergente anfipático usado como desnaturante, ou seja, para converter as moléculas numa estrutura linear e conferir-lhes densidade de carga uniforme. Na ausência do SDS, as proteínas com massas iguais podem migrar diferentemente na malha do gel devido ao diferencial de cargas de suas estruturas tridimensionais.

Eletroforese Poliacrilamida – Nitrato de Prata Reações de PCR para fatores de virulência de E. coli. Mapeamento de determinados genes.

Eletroforese Bidimensional ou 2D  (^) As proteínas são submetidas a dois processos consecutivos de separação: A focalização isoelétrica - separa as moléculas gel, formando um gradiente de pH, estas migram até atingirem uma posição estacionária com ponto isoelétrico Eletroforese Desnaturante, separa as moléculas conforme as massas moleculares.

Eletroforese Bidimensional 2D Visualização e identificação de várias proteínas de uma vez.