PL1- PROTEÍNAS – DOSEAMENTO POR ESPETROFOTOMETRIA
UV/VISÍVEL
CONCEITOS BÁSICOS SOBRE ONDAS E COR
Frequência = 1 oscilação por segundo
Os λ ,comprimentos de onde) que uma certa substância absorve são característicos da sua
estrutura.
Cada substância tem um espetro de absorção característico, podendo, desta forma, ser
identificada.
LEI DE LAMBERT-BEER
A quantidade de radiação absorvida pode ser calculada de diferentes formas:
▪ Transmitância T = I/I0 T,%)
= 100 x T
▪ Absorvância A = log10 I0 /I A
= log10 1/T
LEIS DA ABSORÇÃO
1. A absorção da luz é tanto maior quanto mais concentrada for a solução que ela
atravessa
Ex: Absorvância: 20g/l > 10g/l
2. A absorção da luz é tanto maior quanto maior for a distância percorrida pelo feixe
luminoso através das amostras
Ex: Tem maior absorvância 3cm > 1cm
LIMITE DE LINEARIDADE
A concentração tem um limite de saturação.
Com o aumento da concentração a linearidade deixa de ser constante.
O limite de linearidade é 2 mg/ml.
Uma amostra desconhecida só e lida até 2 mg/ml e 0.40 de absorvância.
A absorvância é o dobro da concentração, mas só até o limite de linearidade.
