Microscopia, Notas de estudo de Enfermagem

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MICROSCOPIA

1° Período/

Prof.ª Adriana L. de Oliveira Faria Fundamentos Morfológicos Embriológicos e Genéticos das Células e dos Tecidos I

Métodos de Estudo das

Células

Aula 2

Tecnologias de Análise

 MÉTODOS DE OBSERVAÇÃO



• Microscopia Óptica 
• Microscopia Eletrônica  MÉTODOS DE DETECÇÃO 
• Citoquímica 
• Imunocitoquímica 
• Radioautografia  MÉTODOS DE SEPARAÇÃO  (^) • Fracionamento Celular  (^) • Cromatografia, Eletroforese,...

Preparação de amostras

para

estudo ao microscópio

Espécimens: células vivas ou fixadas

• Amostras fixadas - preservação dos componentes
• Evitar alterações pela técnica = artefatos 
  • ETAPAS DO PROCESSO: 
  1. Fixação 
  2. Microtomia 
  3. Coloração específicos para microscopia óptica ou eletrônica

Preparação de amostras

para

estudo ao microscópio

 (^) MICROTOMIA

• corte em fatias finas pelo MICRÓTOMO
• amostra incluída e protegida por matriz ou resina
• facilitar o corte e proteger tecido
• microscopia óptica: parafina ou resina plástica
• espessura 1 a 6 micrômetro (μm)m)
• micrótomo com navalha de aço
• microscopia eletrônica: resina dura tipo epóxi
• espessura 0,02 a 0,1 micrômetro (μm)m)
• micrótomo com navalha de vidro ou diamante

Micrótomo

Microscopia Óptica

Comum

com coloração

CÉLULA VEGETAL CÉLULA

Limites de Resolução

Microscopia Óptica

• Ampliação total=

aumento da objetiva x aumento da ocular

• Poder resolução =

capacidade separar detalhes – ex.: ..

• Limite de Resolução (LR) =

função da objetiva, ocular apenas

aumenta imagem

Tipos de microscopia

óptica

em função da luz

1. Microscopia de Polarização
2. Microscopia de Contraste de Fase
3. Microscopia Confocal
4. Microscopia Fluorescente

Microscopia de Contraste de Fase

• transforma diferenças de fase do feixe de luz em diferenças de intensidade
• velocidade da luz e índice de refração afetados pela densidade de corpo densidade = < velocidade e < índice de refração
• estruturas celulares com densidade diferentes
• diferença de fase -> dif. amplitude e intensidade
• uso em células vivas
• fase positiva e negativa

Comum Contraste fase positiva Comum Contraste fase positiva Interferência Contraste fase negativa

Microscopia de Fluorescência compostos fluorescentes:

• emitem luz de determinado comprimento de onda
• excitados por luz de certo comprimento de onda
• constituintes celulares: vitamina A, riboflavina
• corantes

Microscopia por Fluorescência