Universidade do Estado do Rio Grande do Norte - UERN
Faculdade de Ciências Exatas e Naturais - FANAT
Departamento de Ciências Biológicas – DECB
Discilplina : Genética Básica
Wesley Alves
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Sequenciamento de DNA, Notas de estudo de Ciências Biologicas
Tecnicas de sequênciamento e hibridização de DNA
Tipologia: Notas de estudo
2011
1 / 44
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Universidade do Estado do Rio Grande do Norte - UERN Faculdade de Ciências Exatas e Naturais - FANAT Departamento de Ciências Biológicas – DECB Discilplina : Genética Básica Wesley Alves
Sequenciamento in situ
Procedimento para determinar a sequencia de nucleotídeos de um fragmento de DNA.
Histórico
Hood: Semi-automatizado (1986); Venter: Genoma de bactéria usando ddNTPs fluorescentes automatizados, robóticas e PCR (1995); Perkins-Elmer Corp: Comercializado o Sequenciamento totalmente automatizado (1999)
Sequenciamento Manual
Método enzimático; Método de degradação química.
Sequenciamento
Automático
(^) Eliminação da montagem da placa e preparação do gel; (^) Aplicação das amostras por eletroinjeção; (^) Alta velocidade e resolução na separação das amostras.
Métodos de Sequenciamento de DNA Sanger – consiste na adição de didesoxiribonucleotídeos, impedindo o crescimento de um fragmento de DNA em replicação; Pirossequenciamento – determinação da sequência de DNA com estruturas secundárias complexas;
Aplicações
Análise genômica
Aplicações
Aplicações
Conservação das espécies
Aplicações
DNA barcoding; Genômica comparada; Descoberta de drogas; Screening genético.
Sequenciamento
químico
Tratamento com substâncias químicas que cortam a molécula de DNA em nucleotídeos específicos.
Pirosequenciamento
Determinação da sequência de DNA com estruturas secundárias complexas;
Materiais
Tampão H 2 O Milli Q Taq Polimerase Prime r dNTPs ddNTPs DNA
Vetor
Vetor DNA circular Gene