UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ
FACULDADE DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIAS E LETRAS DO SERTÃO
CENTRAL
CURSO: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
DISCIPLINA: BIOQUÍMICA
PROFª.: MARIA GONÇALVES
EQUIPE:
DAYANA OLIVEIRA
DEWISON SILFARNEY
ISABELA DE OLIVEIRA
SARA RIBEIRO
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Sequenciamento,eletroforese,DNA recombinante,PCR
Tipologia: Notas de estudo
Antes de 2010
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CENTRAL
CURSO: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
DISCIPLINA: BIOQUÍMICA
PROFª.: MARIA GONÇALVES
EQUIPE:
DAYANA OLIVEIRA
DEWISON SILFARNEY
ISABELA DE OLIVEIRA
SARA RIBEIRO
SEQUENCIAMENT
O DE DNA
METILAÇÃO NO DNA
A metilação do
DNA endógeno
protege-o da
clivagem pelas
enzimas de
restrição.
CH
CH
Enzimas que clivam de 4 a 8 pares
de nucleotídeos;
Enzima Hae III corta uma
sequência de quatro pares de
nucleotídeos;
Enzima Not I cliva 8 pares.
ELETROFORESE
Foi desenvolvida pelo químico Arne Tiselius para o estudo de proteínas em
soro e por este trabalho ele ganhou o prêmio Nobel em 1948
Técnica para separar proteínas ,DNA e RNA
São separadas de acordo com o seu tamanho e carga
elétrica
É baseada no movimento de partículas carregadas,
em direção a um eletrodo de carga contrária
Com o uso de eletrodos, uma corrente elétrica é passada através desse meio
para induzir a separação
Agarose é um polissacarídeo, e forma uma rede que segura as moléculas
durante a migração,separa fragmentos maiores e poliacrilamida (mistura de dois
polímeros, acrilamida e bisacrilamida) menores ( até 1.000 pares de bases)
Eletroforese em gel de agarose (pó de agarose + solução tampão ‘tbe’, após
fundir coloca-se brometo de etídeo) que fará o DNA ou RNA "brilhar" quando
exposto ao UV.
Géis são usados como suporte para eletroforese
A carga das moléculas fazem com que elas se movam em direção de um
eletrodo de caga contrária
Ácidos Nucléicos são carregados negativamente devido
seus grupos fosfatos
Os oligonucleotídeos menores se deslocam mais do que
os maiores
O gel em posição vertical, é utilizado na determinação da
sequência das bases do DNA
Vídeo Eletroforese
ENGENHARIA GENÉTICA –
DNA RECOMBINANTE (DNAr)
- Permite isolar um gene específico,
com uma característica desejada, e
transferir este gene para outro
organismo vivo;
FORMAÇÃO DO DNAr E DO DNAc
DNA RECOMBINANTE
(DNAr)
Requer corte e emenda
de duas fitas de DNA de
maneira específicas;
CORTE: Enzimas –
endonucleases de
Restrição; extremidades
adesivas.
EMENDA: DNA – ligases;
Utilizam de
Extremidades Adesivas;
VETORES: Entidades,
constituídas por DNA,que
transfere DNA de uma
célula doadora(organismo)
para uma célula
receptora(organismo);
VETORES (CONT.)
PLASMÍDEOS :
Podem transferir DNA recombinante
para dentro da célula;
- Possui apenas um sítio de ligação;
- Utilização de uma enzima de restrição;
- Fácil manipulação em laboratório ;
- Grande parte da biologia molecular já é
conhecida. Ex.: E. coli
VETORES (CONT.)
BACTERIÓFAGO :
- Vírus de bactérias;
- Fita dupla linear;
- Recirculariza durante
a infecção na bactéria;
- Aceita até 20 mil pb
YACs ( CROMOSSOMOS
ARTIFICIAIS)
Criação dos YACs (criação artificial de leveduras);
O plasmídeo não se replica em leveduras;
Sequência de DNA procarióticas e eucarióticas
usam origem de replicação diferentes ;
Possui sítios de restrição individuais e genes
marcadores úteis;
Acomoda um insetor de DNA variando de 50 mil
- 1,5 milhão pb;
Desenvolvimento de HAC (cromossomo artifial
humando)