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ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE MACRÓFAGOS, Apuntes de Biología Celular

Descripción y actividad previa para una practica de actividad enzimatica de macrófagos

Tipo: Apuntes

2019/2020

Subido el 05/03/2020

DianeM92
DianeM92 🇲🇽

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ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE MACRÓFAGOS
1. ¿Qué es, cómo se prepara y qué función tiene el suero fisiológico?
La solución de cloruro de sodio al 0,9% o solución salina normal, también conocido como suero
fisiológico o solución fisiológica (ya que carece de elementos proteicos), es una disolución acuosa de
sal en agua, hasta cierto grado compatible con los organismos vivos debido a sus características
definidas de osmoticidad, pH y fuerza iónica. Es la base para la dilución de otras sustancias, como
por ejemplo la glucosa, fuente de carbono y energía para el organismo, y de algunos polisacáridos
expansores, cambiando así totalmente su uso, osmolaridad y nombre. (Wise, 2017)
2. Sugiera un procedimiento para la obtención de macrófagos de cavidad peritoneal de ratón CD-1.
Realizar un raspado o desgarre de la cavidad peritoneal con el ratón eutanaciado.
3. ¿Qué función tiene la Hematoxilina de Meyer?
La hematoxilina (del griedo haimatus: sangre y xilon: madera) es un componente natural obtenido
de una planta leguminosa (Haematoxylum campechianum). La hematoxilina tiene que ser oxidada a
hemateína antes de ser usada como colorante y combinada con un metal que actuará como
mordiente. La oxidación puede ser química o por el oxígeno mediante el envejecimiento de la
solución. Es el producto oxidado de la hematoxilina, la hemateína, la que realmente se adhiere a
las sustancias ácidas del tejido. Fundamentalmente tiñe el núcleo. La hematoxilina, la hemateína
como colorante, es un componente de la tinción hematoxilina y eosina, probablemente la tinción
general más usada en tinciones histológicas, pero también de otras tinciones como las tricrómicas
donde se precisa teñir núcleos. (Megías, 2019)
La hematoxilina de Mayer es uno de los tipos de hematoxilina que se emplean normalmente en las
tinciones de hematoxilina-eosina. Su modo de tinción es progresiva, es decir, cuanto más tiempo en
la solución colorante más tinción se consigue en el tejido. (Megías, 2019)
4. Mencione que enzima y cuál es el sustrato en la Tinción alfa-naftil acetato esterasa.
Las esterasas son enzimas encargadas de catalizar la hidrólisis de ésteres alifáticos u aromáticos en
sus componentes ácidos y alcoholes. Para demostrar su actividad el Comité Internacional de
Estandarización en Hematología recomienda usar fundamentalmente los siguientes sustratos:
El cloroacetato de naftol AS-D
El alfa naftil acetato (pH 6)
El alfa naftil butirato
El naftol acetato AS-D
Dichos sustratos reconocen los tres tipos de esterasas mieloides: la esterasa específica de los
granulocitos demostrada usando CAE; la esterasa específica de los monocitos, y un grupo de
esterasas que son expresadas por muchas células hematopoyéticas llamadas “esterasas comunes”.
Según el Comité de hematología, las esterasas monocíticas y comunes son consideradas esterasas
inespecíficas, ya que ambas pueden reaccionar con un mismo sustrato. Solo la granulocítica es
específica.
La α-naftil acetatoesterasa (ANAE): detecta las esterasas monocito específica (EME) y esterasas
comunes (ECOM); pues el α-naftil acetato es sustrato de ambas esterasas, pero no lo es de la
granulocítica. Una reacción positiva refleja la presencia de una o de ambas esterasas. La ANAE da
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ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE MACRÓFAGOS

  1. ¿Qué es, cómo se prepara y qué función tiene el suero fisiológico? La solución de cloruro de sodio al 0,9% o solución salina normal, también conocido como suero fisiológico o solución fisiológica (ya que carece de elementos proteicos), es una disolución acuosa de sal en agua, hasta cierto grado compatible con los organismos vivos debido a sus características definidas de osmoticidad, pH y fuerza iónica. Es la base para la dilución de otras sustancias, como por ejemplo la glucosa, fuente de carbono y energía para el organismo, y de algunos polisacáridos expansores, cambiando así totalmente su uso, osmolaridad y nombre. (Wise, 2017)
  2. Sugiera un procedimiento para la obtención de macrófagos de cavidad peritoneal de ratón CD-1. Realizar un raspado o desgarre de la cavidad peritoneal con el ratón eutanaciado.
  3. ¿Qué función tiene la Hematoxilina de Meyer? La hematoxilina (del griedo haimatus : sangre y xilon : madera) es un componente natural obtenido de una planta leguminosa ( Haematoxylum campechianum ). La hematoxilina tiene que ser oxidada a hemateína antes de ser usada como colorante y combinada con un metal que actuará como mordiente. La oxidación puede ser química o por el oxígeno mediante el envejecimiento de la solución. Es el producto oxidado de la hematoxilina, la hemateína, la que realmente se adhiere a las sustancias ácidas del tejido. Fundamentalmente tiñe el núcleo. La hematoxilina, la hemateína como colorante, es un componente de la tinción hematoxilina y eosina, probablemente la tinción general más usada en tinciones histológicas, pero también de otras tinciones como las tricrómicas donde se precisa teñir núcleos. (Megías, 2019) La hematoxilina de Mayer es uno de los tipos de hematoxilina que se emplean normalmente en las tinciones de hematoxilina-eosina. Su modo de tinción es progresiva, es decir, cuanto más tiempo en la solución colorante más tinción se consigue en el tejido. (Megías, 2019)
  4. Mencione que enzima y cuál es el sustrato en la Tinción alfa-naftil acetato esterasa. Las esterasas son enzimas encargadas de catalizar la hidrólisis de ésteres alifáticos u aromáticos en sus componentes ácidos y alcoholes. Para demostrar su actividad el Comité Internacional de Estandarización en Hematología recomienda usar fundamentalmente los siguientes sustratos:  El cloroacetato de naftol AS-D  El alfa naftil acetato (pH 6)  El alfa naftil butirato  El naftol acetato AS-D Dichos sustratos reconocen los tres tipos de esterasas mieloides: la esterasa específica de los granulocitos demostrada usando CAE; la esterasa específica de los monocitos, y un grupo de esterasas que son expresadas por muchas células hematopoyéticas llamadas “esterasas comunes”. Según el Comité de hematología, las esterasas monocíticas y comunes son consideradas esterasas inespecíficas, ya que ambas pueden reaccionar con un mismo sustrato. Solo la granulocítica es específica. La α-naftil acetatoesterasa (ANAE): detecta las esterasas monocito específica (EME) y esterasas comunes (ECOM); pues el α-naftil acetato es sustrato de ambas esterasas, pero no lo es de la granulocítica. Una reacción positiva refleja la presencia de una o de ambas esterasas. La ANAE da

distintos patrones de reacción: En los monocitos, la reacción es positiva intensa con patrón difuso y es inhibida con NaF (reacción floruro sensible). En los linfocitos T cooperadores la reacción es positiva con patrón de punto focal en la zona del Golgi y puede o no ser inhibida por NaF (tienen diferente grado de resistencia). La EME es muy sensible a la presencia de NaF y por ello se inhibe. Las ECOM muestran grados variables de resistencia. Por lo tanto, si un blasto muestra reacción de ANAE (+) y es NaF resistente, se podría concluir que se trata de ECOM. En cambio si un blasto muestra reacción de ANAE (+) y es NaF sensible, puede ser EME o ECOM. Estos casos problemáticos se deberían resolver usando ANBE. Pero no olvidar que el “patrón” de la reacción positiva es fundamental para interpretar los resultados. Si un blasto es ANAE (+) con patrón difuso y además es sensible al NaF, estamos en presencia de un monoblasto. (Dacie, 2014; Arrollo 1998)

  1. Mencione 5 características morfológicas distintivas de los monocitos. Los monocitos son células de forma irregular. Poseen un núcleo en forma de riñón. Tienen vesículas en el citoplasma. Su diámetro oscila entre 16 a 24 μm. Cuando los monocitos son teñidos con el colorante de Wright, su citoplasma se observa de color azulado. Derivan de células madre pluripotentes de la médula ósea. Los monocitos se producen mediante varios pasos y estados intermedios que incluyen:
  1. un progenitor mieloide común (CMP);
  2. un progenitor granulocito-macrófago (GMP);
  3. el progenitor macrófago-célula dendrítica (MDP). Tienen plasticidad porque se pueden convertir en macrófagos o en células dendríticas. Se convierten en macrófagos cuando entran en los tejidos o podrían diferenciarse en células dendríticas inflamatorias. En los humanos, los monocitos constituyen el 8% de los leucocitos y tienen una vida media de 70 horas, mientras que en ratones constituyen el 4% de los leucocitos y tienen una vida media de 17 horas. (Megias 2019)
  1. ¿Cuál es el fundamento de la tinción citoquímica específica? Las tinciones citoquímicas también son denominadas técnicas citoquímicas o métodos citoquímicos. Son técnicas que determinan la existencia y localización de distintos compuestos químicos en las células. Los compuestos químicos se ponen de manifiesto al teñirse y visualizarse al microscopio óptico. La tinción resulta de la reacción química producida entre el compuesto químico buscado y el reactivo utilizado en la técnica. Las tinciones citoquímicas son diferentes a las tinciones hematológicas. Las primeras ponen de manifiesto compuestos químicas específicas de las células hemáticas. En cambio, las segundas ponen de manifiesto, de forma genérica, las células hemáticas y sus componentes principales (núcleo, citoplasma y granulación).
  2. ¿Cuál es la utilidad de la tinción citoquímica específica en el laboratorio? La determinación de los compuestos químicos celulares como Principios inmediatos.  Enzimas.  Ácidos nucleicos.  Compuestos inorgánicos. (Martinez, 2017; Megias 2019:) REFERENCIAS Wise, R., Faurie, M., Malbrain, M., & Hodgson, E. (2017). Strategies for Intravenous Fluid Resuscitation in Trauma Patients. World journal of surgery, 41(5), 1170–1183. doi:10.1007/s00268-016-3865-