Técnica de preparação de lâmina para
microscopia óptica
Nome: Rafael Rezende Borges
Professor(a): Ana Raquel Santos
Procedimento:
1. Coleta: Para se analisar uma amostra de tecido, faz-se necessário
que essa seja retirada do organismo, vivo ou morto. Por meio de uma
biópsia e/ou cirurgia em um organismo vivo, enquanto em uma
necrópsia em um organismo morto.
2. Fixação: A fixação é a fase destinada a interromper o processo de
autólise pelo qual qualquer tecido passa ao ser retirado do organismo
ou após a sua morte. Além de interromper o metabolismo celular,
conservando o aspecto natural dos tecidos, a fixação estabiliza as
estruturas bioquímicas intra e extracelulares, permite a penetração de
outros reagentes necessários no decorrer de todo o processamento
histológico (como os agentes de coloração, por exemplo), impede que o
tecido seja colonizado por micro-organismos e faz com que a amostra
comece a endurecer. A fixação pode se dar por agentes físicos (frio e
calor) ou químicos (líquidos fixadores), e, muito frequentemente, com
associação dos dois tipos, pois uma fixação química pode sofrer
influência de fatores físicos, como a temperatura do ambiente e ondas
eletromagnéticas, por exemplo.
3. Processamento: Essa fase envolve difusão de reagentes que
possibilite a saída de líquido dos tecidos – pois mesmo depois da
fixação, os tecidos ainda retêm cerca de 85% de água. Inicia-se com a
etapa de Desidratação, em que diversas substâncias desidratantes são
eficazes, variando apenas o tempo de desidratação. Entre elas, pode-se
citar os álcoois butílico, isopropílico e metílico, a acetona, o éter, o
clorofórmio e o óxido propileno. Porém, rotineiramente, é o álcool etílico
o produto mais utilizado para esse fim.
Seguinte, como a parafina é insolúvel em água, e muito pouco em
álcool, faz-se necessário que o álcool presente nas peças após o
processo de desidratação seja substituído por um produto com o qual a
parafina tenha afinidade. Tal etapa é chamada de Diafanização ou
Clarificação.
