Estude fácil! Tem muito documento disponível na Docsity
Ganhe pontos ajudando outros esrudantes ou compre um plano Premium
Prepare-se para as provas
Estude fácil! Tem muito documento disponível na Docsity
Prepare-se para as provas com trabalhos de outros alunos como você, aqui na Docsity
Encontra documentos específicos para os exames da tua universidade
Prepare-se com as videoaulas e exercícios resolvidos criados a partir da grade da sua Universidade
Responda perguntas de provas passadas e avalie sua preparação.
Ganhe pontos para baixar
Ganhe pontos ajudando outros esrudantes ou compre um plano Premium
Relatorio de aula pratica de espectrofotometria
Tipologia: Notas de aula
1 / 15
Esta página não é visível na pré-visualização
Não perca as partes importantes!
Bruna Pazzini Laís Manica
Disciplina: Análise Instrumental de Alimentos Professor: Marcelo
Passo Fundo 2010
Tabela 1: Curva Padrão de Ferro.................................................................................... Tabela 2: Dados da transmitância (%T) das 4 amostras.................................................
Tabela 3: Dados da absorbância da amostra Azul.......................................................... Tabela 4: Dados da absorbância da amostra Amarela.................................................... Tabela 5: Dados da absorbância da amostra Lilás........................................................... Tabela 6: Dados da absorbância da amostra Rosa...........................................................
Figura 1: Gráfico A x Comprimento de onda da amostra azul....................................... Figura 2: Gráfico A x Comprimento de onda da amostra amarela ................................. Figura 3: Gráfico A x Comprimento de onda da amostra Lilás...................................... Figura 4: Gráfico A x Comprimento de onda da amostra Rosa...................................... Figura 5: Gráfico de curva padrão de ferro.....................................................................
F 06 C
necessárias. No campo da saúde, 95% de todas as determinações quantitativas são feitas por espectrometria de ultravioleta/visível. A espectrofotometria é o método de análise óptico mais usado nas investigações biológicas e fisico-químicas. O espectrofotômetro é um instrumento que permite comparar a radiação absorvida ou transmitida por uma solução que contém uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substância. Todas as substâncias podem absorver energia radiante, mesmo o vidro que parece completamente transparente absorve comprimentos de ondas que pertencem ao espectro visível. A água absorve fortemente na região do infravermelho. A absorção das radiações ultravioletas, visíveis e infravermelhas depende das estruturas das moléculas, e é característica para cada substância química. Quando a luz atravessa uma substância, parte da energia é absorvida: a energia radiante não pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida. A cor das substâncias se deve a absorção de certos comprimentos de ondas da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos apenas aqueles comprimentos de ondas não absorvidos. O instrumento usado na espectroscopia UV/VIS é chamado de espectrofotômetro. Para se obter informação sobre a absorção de uma amostra, ela é inserida no caminho óptico do aparelho. Então, luz UV e/ou visível em certo comprimento de onda (ou uma faixa de comprimentos de ondas) é passada pela amostra. O espectrofotômetro mede o quanto de luz foi absorvida pela amostra.
2 DESENVOLVIMENTO
A espectrofotometria é um método analítico que baseia-se na interação (absorção e/ou emissão) da matéria com a energia radiante, ou seja, radiação
eletromagnética quando os elétrons se movimentam entre níveis energéticos. A absorção da radiação luminosa acontece nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho no espectro da radiação eletromagnética. Um espectrofotômetro é um aparelho que faz passar um feixe de luz monocromática através de uma solução, e mede a quantidade de luz que foi absorvida e a luz transmitida por essa solução. Usando um prisma, o aparelho separa a luz em feixes com diferentes comprimentos de onda. O espectrofotômetro permite saber que quantidade de luz é absorvida a cada comprimento de onda. As substâncias têm diferentes padrões de absorção, a espectrofotometria permite identificar substâncias com base no espectro da substancia. Permite também quantificá- las, uma vez que a quantidade de luz absorvida está relacionada com a concentração da substância. A medida da luz absorvida permite inferir sobre a concentração do soluto em determinada solução. Compostos desconhecidos podem ser identificados por seus espectros característicos ao ultravioleta, visível ou infravermelho. Quando uma radiação eletromagnética, por exemplo, a luz visível, incide em uma solução, se os fótons da radiação têm energia adequada, a energia associada a essa radiação pode sofrer três diferentes tipos de variações:
Nas aplicações espectrofotométricas, quando se usa energia monocromática em um simples comprimento de onda (λ), a fração de radiação absorvida pela solução, ignorando perdas por reflexão, será função da concentração da solução e da espessura da solução. Portanto, a quantidade de energia transmitida diminui exponencialmente com o aumento da espessura atravessada – Lei de Lambert – e o aumento da concentração ou da intensidade de cor da solução – Lei de Beer. A relação entre energia emergente (I) e energia incidente (I0) indica a transmitância (T) da solução. Em espectrofotometria, utiliza-se a absorbância (A) como a intensidade de radiação absorvida pela solução, seguindo as leis de Lambert-Beer. A determinação de concentração de um soluto em uma solução-problema por espectrofotometria envolve a comparação da absorbância da solução-problema com
2.2.1 F 06 C de máxima absorção
Material Água destilada 4 cubetas Papel para limpeza de cubetas 4 amostras de soluções de cores diferentes Espectrofotômetro.
Métodos Calibrar o aparelho com água destilada, ajustando 100% de transmitância, no primeiro comprimento de onda utilizado (400nm). Transferir o indicador na forma ácida para um Becker de 50 mL. Transferir parte da solução para a cubeta, e anotar a transmitância da solução. Calibrar o aparelho novamente com água destilada, ajustando 100% de transmitância, no comprimento de onda seguinte, 440 nm, e então ler a transmitância da mesma solução e anotar a transmitância da solução. Continuar a prática com a mesma solução nos Y= 480nm, 520nm, 560nm, 590nm, 620nm, 660nm e 690nm. Apos completada a varredura de y, voltar a solução que estava na cubeta para o becker. Então no becker transferir a forma básica do indicador, e fazer nova varredura do espectro.
2.2.2 Determinação espectrofotométrica de ferro em água mineral
Preparou-se a solução mãe de 1000 ppm de Fe2+^ , em balão de 250 mL. Antes de completar o menisco do balão com água destilada, adicionaram-se 5 gotas de ácido sulfúrico concentrado. A partir da solução mãe, preparou-se a solução estoque de 100 ppm de Fe 2+^ em balão de 200 mL e com esta solução estoque foi preparada a curva padrão de Fe 2+^ conforme mostra a Tabela 2.
Tabela 1 Curva padrão de Fe2+^ preparada a partir da solução estoque de 100 ppm Concentração branco 0,2 ppm 0,7 ppm 1,5 ppm 3,0 ppm Volumes 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL
Após o preparo das soluções da curva padrão, com cada uma delas, preparou-se a solução para realizar a leitura. Para isso, pipetou-se 25 mL de cada amostra para um frasco plástico. Pipetou-se 25 mL de cada padrão da curva e do branco em frasco plástico. Foram adicionadas 10 gotas de solução a 10% de cloridrato de hidroxilamina em cada frasco plástico. Agitou-se o frasco por alguns segundos e adicionou-se 20 gotas da solução de acetato de sódio 1,5 mol/L em cada frasco plástico. Então foram adicionadas 20 gotas de solução 0,1% de orto-fenantrolina em cada frasco plástico e esperou-se 10 minutos para realizar as leituras. A varredura da absorbância da solução de 1,5 ppm de Fe 2+^ foi realizada nos seguintes comprimentos de onda: 490nm, 495nm, 500nm, 505nm, 510nm, 515nm. No comprimento de onda de maior absorção, leu-se a absorbância das amostras e dos padrões da curva. Foram preparadas três soluções a partir da solução mãe descrita anteriormente, sendo que apenas uma delas estava em uma concentração que permitia leitura espectrofotométrica. Foi seguido o mesmo procedimento de preparo da amostra para a leitura. Realizou-se leitura no comprimento de onda de 495 nm e as duas soluções que apresentaram-se fora do limite de leitura foram diluídas. A menos concentrada foi diluída de 5 mL em 100 mL (20 vezes) e a mais concentrada de 1 mL em 100 mL ( vezes) e procurou-se saber qual a concentração de ferro nestas soluções.
Tabela 4: Dados da absorbância da amostra Amarela
Comprimento de Onda (nm)
Amostra Amarela 400 1, 440 1, 480 0, 520 0 560 0 590 0 620 0 660 0
Comprimento de Onda (nm)
Amostra Lilás 400 0, 440 0, 480 0, 520 0, 560 0, 590 0, 620 0, 660 0,
Tabela 5: Dados da absorbância da amostra Lilás
Comprimento de Onda (nm)
Amostra Rosa 400 0, 440 0, 480 0, 520 1, 560 0 590 0 620 0 660 0 Tabela 6: Dados da absorbância da amostra Rosa
Os gráficos de cada amostra de cor relacionam o comprimento de onda (nm) X Abs
Gráfico 1: A x Comprimento de onda da amostra Azul
Gráfico 2: A x Comprimento de onda – amostra Amarela
Figura 2 apresenta a curva preparada com concentrações conhecidas de ferro e a respectiva equação da reta. O último ponto de leitura, concentração 3,0 ppm, foi desconsiderado, pois não estava respeitando a Lei de Beer.
Gráfico 5: Curva padrão de Fe2+^ no comprimento de onda de 495 nm
Após a construção da curva foram realizadas mais três leituras para as soluções nomeadas A, B e C que apresentaram os seguintes valores de absorbância: 0,615 para A, 1,822 para B e C não obteve leitura. Com esses resultados foi realizada uma nova diluição das soluções B ( 20 vezes) e C ( 100 vezes), obtendo-se assim um novo resultado de leitura de absorbância: 0,084 para B e 0,151 para C. Os valores foram substituídos na equação da reta construída e com isso se obteve a concentração de ferro em cada solução. A quantidade de ferro encontrada na solução A foi cerca de 4,02 ppm, a solução B apresentou na primeira leitura cerca de 12,2 ppm e após a diluição 11,2 ppm. A alta concentração de ferro aumenta o desvio da absorbância e esta diferença deve estar relacionada a um possível erro de leitura, principalmente na solução sem diluição. A solução C apresentou cerca de 15,1 ppm de concentração de ferro, o que impossibilita a leitura.
A espectrofotometria é um método de análise baseado em medidas de absorção de radiação eletromagnética. Os métodos espectrofotométricos são utilizados na aplicação a sistemas orgânicos e inorgânicos, seletividade moderada a alta, boa exatidão, facilidade e conveniência de aquisição de dados. Conclui-se que a absorção UV oferece menos possibilidades para identificação de grupos funcionais, mas é muito utilizada na identificação dos constituintes das diversas partes das plantas e na determinação em amostras inorgânicas. F 06 C de máxima absorção:
λ de maior absorbância Cor 51,6 % T – 400nm Azul 5,7 % T – 440nm Amarelo 70,7% T – 520nm Lilás 2,9% T – 520nm Rosa Tabela 4: Valores de maior absorbância Comparando com a tabela bibliográfica nota-se que o amarelo é a unica cor que coincide e o gráfico mostra que quanto maior o comprimento de onda menor a absorbância e vice- versa. Também levando em consideração a concentração de cada corante, e a calibração em cada toca de comprimento de onda. Esta pratica também ajudou no entendimento do espectrofotometro bem como o seu funcionamento,
Determinação espectrofotométrica de ferro em água mineral:
O trabalho tornou possível um maior aprendizado do funcionamento do espectrofotômetro, além da preparação de soluções para leitura a partir de uma solução padrão, como também a diluição em menores concentrações para se tornar possível a leitura no aparelho. Os resultados obtidos permitiram a análise e comparação da absorbância em diferentes F 06 C de onda e também a análise das concentrações, se estavam ou não de acordo com a Lei de Beer.
