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UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS FACULDADE DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS ÁREA DE MEDICAMENTOS DISCIPLINA DE CONTROLE DE QUALIDADE DE MEDICAMENTOS E COSMÉTICOS
Profa. Kátia Solange Cardoso Rodrigues dos Santos
Aula Prática
Validação de metodologia analítica para doseamento de propranolol por UV
Um grupo de pesquisadores propôs uma alteração na composição de cápsulas de cloridrato de propranolol (vide fórmulas abaixo), substituindo o diluente, celulose microcristalina, por quitosana, um polissacarídeo que tem se mostrado promissor em processos farmacêuticos.
FÓRMULA ATUAL Propranolol................................................40mg Talco..........................................................15% Celulose microcristalina................qsp.......1 cápsula
FÓRMULA EM ESTUDO Propranolol................................................40mg Talco..........................................................15% Quitosana....................qsp.........................1 cápsula
Sendo assim, como houve alteração da composição do produto, a metodologia analítica, que doseia o propranolol por Espectrofotometria no UV, precisa ser revalidada para assegurar que o método continua sendo confiável para os ensaios de qualidade desse medicamento.
A) MATERIAIS:
- notebook com Excell;
- calculadora científica.
B) PROCEDIMENTOS: 1ª ETAPA – Quais os testes que deverão ser realizados, segundo a RE/ANVISA no. 899, de 29 de maio de 2003? Para responder essa pergunta, identifique a Categoria (I, II, III ou IV) em que a situação-problema narrada se enquadra.
2ª ETAPA – Construção da curva de calibração. Para a construção da curva de calibração, os pesquisadores e técnicos do Laboratório de Controle de Qualidade dessa indústria, em atenção à RE/ANVISA no. 899, de 29 de maio de 2003, prepararam 5 diluições (32 μg/mL; 36 μg/mL; 40 μg/mL; 44 μg/mL e 48 μg/mL) e mediram suas respectivas absorbâncias em triplicata, conforme tabela abaixo:
2.1) Com o auxílio da calculadora, calcule a média das absorbâncias medidas para a triplicata a 32 μg/mL;
Concentração teórica (μg/mL)
Absorbância Replicata 1
Replicata 2
Replicata 3 32 0,646 0,674 0, 36 0,755 0,763 0, 40 0,846 0,846 0, 44 0,928 0,926 0, 48 0,997 0,998 1,
2.2) Com o auxílio da planilha Excell, calcule a média das absorbâncias medidas para as triplicatas de cada concentração (compare com o resultado do tópico 2.1); 2.3) Plote um gráfico de x em função de y, ou de concentração (abscissa x) em função da absorbância média calculada no tópico 2.2 (ordenada y); 2.4) Analise o coeficiente de regressão linear (r^2 ) e aprove/reprove o método no quesito linearidade.
3ª ETAPA – Ensaio de precisão intra-corrida ou repetibilidade. Para esse ensaio, foram preparadas 3 diluições (32 μg/mL; 40 μg/mL e 48 μg/mL) e suas respectivas absorbâncias foram medidas no mesmo dia, no mesmo equipamento e pelo mesmo analista, conforme dados abaixo:
3.1) Com o auxílio da calculadora, calcule concentração real da solução a 32 μg/mL, utilizando a equação da reta obtida na 2ª. ETAPA; 3.2) Com o auxílio da planilha Excell, calcule a concentração real de cada solução correspondente às absorbâncias medidas, utilizando a equação da reta obtida na 2ª. ETAPA (compare com o resultado do tópico 3.1); 3.3) Calcule a concentração média de cada triplicata; 3.4) Calcule o desvio padrão (DP) para cada triplicata de concentração; 3.5) Com o auxílio da calculadora, calcule o desvio padrão relativo (DPR) ou coeficiente de variação (CV) para cada triplicata de concentração a 32 μg/mL; 3.6) Com o auxílio da planilha Excell, calcule o DPR (ou CV) para cada triplicata de concentração (compare com o resultado do tópico 3.5); 3.7) Analise o DPR de cada triplicata de concentração e aprove/reprove o método no quesito repetibilidade.
4ª ETAPA – Ensaio de precisão inter-corrida ou precisão intermediária. Para avaliar a precisão inter-corrida, 2 analistas diferentes, em dias diferentes, determinaram a absorbância de 3 diluições (32 μg/mL; 40 μg/mL e 48 μg/mL), em triplicatas, conforme dados abaixo:
4.1) Com o auxílio da calculadora, calcule concentração real da solução a 32 μg/mL, utilizando a equação da reta obtida na 2ª. ETAPA; 4.2) Com o auxílio da planilha Excell, calcule a concentração real de cada solução correspondente às absorbâncias medidas, utilizando a equação da reta obtida na 2ª. ETAPA (compare com o resultado do tópico 4.1); 4.3) Calcule a concentração média de cada sextuplicata;
Concentração teórica (μg/mL)
Absorbâncias Replicata 1(10h)
Replicata 2(16h)
Replicata 3(18h) 32 0,651 0,622 0, 40 0,829 0,851 0, 48 0,991 0,998 0,
Concentração teórica (μg/mL)
Absorbâncias Analista 1 (15/11/2014) Analista 2 (19/11/2014) Replicata 1(9h)
Replicata 2(13h)
Replicata 3(17h)
Replicata 1(10h)
Replicata 2(14h)
Replicata 3(19h) 32 0,671 0,659 0,711 0,679 0,710 0, 40 0,815 0,841 0,891 0,855 0,889 0, 48 1,023 1,004 1,037 1,031 1,019 1,
6.1) Com o auxílio da planilha Excell, calcule a concentração real de cada solução correspondente às absorbâncias medidas, utilizando a equação da reta obtida na 2ª. ETAPA; 6.2) Calcule a concentração média de cada nonuplicata; 6.3) Calcule o desvio padrão (DP) para cada nonuplicata de concentração; 6.4) Calcule o DPR (ou CV) para cada nonuplicata de concentração; 6.5) Analise o DPR de cada nonuplicata de concentração e aprove/reprove o método no quesito repetibilidade. 6.6) Calcule o percentual de recuperação de cada nonuplicata de concentração; 6.7) Analise percentual de recuperação de cada triplicata de concentração e aprove/reprove o método no quesito exatidão. 6.8) Analise os resultados nos tópicos 6.5 e 6.7 e aprove/reprove o método no quesito robustez.
7ª ETAPA – Conclusão sobre a validação do método Com base em todos os resultados obtidos, classifique o método como satisfatoriamente validado ou não.
