CELMGEL
FILME DE AGAROSE GERAL
Filmes de agarose para separação eletroforética de proteínas e lipoproteínas.
Somente para uso "in vitro".
Artigo N
o
1801 10 x 10 Determinações
I. PROTEINOGRAMA
INTRODUÇÃO
A análise do quadro protéico-plasmático é importante, pois se podem diagnosticar várias
alterações patológicas. Entre os métodos de qualificação e quantificação dessas proteínas
destaca-se a eletroforese, que se tem tornado um importante meio auxiliar de diagnóstico na
maioria dos laboratórios clínicos. A eletroforese permite uma avaliação aproximada das
concentrações de várias proteínas importantes, cujas alterações, seja de regulação de suas
sínteses, ou de seu maior consumo, podem refletir nas suas mobilidades eletroforéticas ou
nas suas concentrações.
AMOSTRA
Usar soro fresco livre de hemólise por até 3 dias mantidos em geladeira (2 a 8
o
C). O
congelamento é desaconselhável.
PROCEDIMENTO
1) Colocar 80 mL de * tampão tris pH 9,5 gelado (2 a 8
o
C) , na cuba.
2) Aplicar 0,4 µ
µµ
µL de cada soro no filme de agarose.
3) Colocar o filme de agarose no porta-filme coincidindo os pólos negativos do filme com a
cuba.
4) Colocar o porta-filme na cuba e tampá-la. Deixar por 20 minutos a 100 volts.
5) Retirar a tampa da cuba e o porta-filme, colocando-a sobre uma folha de papel de filtro
para eliminar o excesso de tampão das bordas do filme.
6) Retirar o filme do porta-filme.
7) Mergulhar o filme em 200 mL de corante por 5 minutos sem agitação.
8) Retirar o filme do corante e colocar em 200 mL de descorante por 5 minutos.
9) Retirar o excesso de descorante do filme e colocá-lo a 60
o
C (55
o
C a 65
o
C), até que o
mesmo fique completamente seco. Sugerimos o uso de secador de cabelos com
aquecimento.
10) Colocar o filme de agarose no descorante até o fundo ficar transparente. Se necessário,
trocar o descorante.
11) Secar a 60
o
C (55
o
C a 65
o
C) novamente.
12) Ler no scanner ou no densitômetro à 520 nm. Pode-se ainda fazer a eluição das bandas
com NaOH 2% (2 g NaOH em 100 mL H
2
O): recortar cada fração e colocar em 2 mL do
eluente. Após a dissolução, ler a absorbância em 580 nm.
* Não reutilizar o tampão
Materiais necessários não fornecidos:
Corante - Negro de Amido (Amido Black 10-B - art. 1810 - CELM) 0,1% em ácido acético a
5%.
Descorante - ácido acético a 5%.
Revisão: P&D – Maio/2003
VALORES DE REFERÊNCIA
%
g/dL
Albumina 53,70 a 62,9 3,60 a 4,20
Alfa - 1 3,30 a 5,20 0,20 a 0,40
Alfa - 2 7,20 a 11,20 0,50 a 0,80
Beta 10,40 a 14,70 0,70 a 1,00
Gama 10,80 a 19,70 0,70 a 1,40
Recomenda-se que cada laboratório estabeleça seus próprios valores de referência.
ILUSTRAÇÃO DA SEPARAÇÃO DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS
Conc. 6.14
Nome: Paciente Frações %
1
2
3
4
5
6
0,5
57,8
3,5
7,9
13,6
16,5
0,031
3,552
0,217
0,487
0,838
1,015
Gráfico obtido no aparelho DS-35
Gráfico obtido no sistema SE-250
Observações
1. Em mulheres usuárias de contraceptivos orais e gestantes, os valores de albumina e gama-globulina
apresentam-se ligeiramente inferiores aos intervalos apresentados. Pela mesma razão, as frações alfa-1-
globulina, alfa-2-globulina e beta-globulina apresentam valores ligeiramente superiores aos i ntervalos citados
(vide referência bibliográfica 2 no verso desta página).
CELM - Cia. Equipadora de Laboratórios Modernos
Al. Amazonas, 764 - Alphaville - Barueri - SP - CEP 06454-
070
Fone: (55XX11) 41911647 - Fax: (55XX11) 4195-5916
CNPJ 61.086.823/0001-76 - IND. BRAS.
Farm. Resp.: Douglas Pedrassa CRF - SP - 21.172
REG. MS 10125310089
SACC (Serviço de Atendimento ao Cliente CELM): 0800 553 5 52
Visite nossa home page www.celm.com.br
E-mail: [email protected]
