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relatorio feito utilizando eletroforese
Tipologia: Exercícios
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Universidade Federal do Vale do São Francisco Colegiado de Ciências Biológicas Genética Molecular Docente: Michely Diniz Discente: Lavínia de Souza Duarte 1.Título: Técnicas de Eletroforese 2.Introdução: A eletroforese é uma técnica usada para separar, e algumas vezes purificar, macromoléculas, especialmente ácidos nucleicos e proteínas, que diferem em tamanho, carga e conformação. Como tal, é uma das técnicas mais usadas em laboratórios de bioquímica e de biologia molecular (MIGUEL et al, 2002; HAMES, 1998; TREVILATTO & WERNECK, 2014). Os géis utilizados para eletroforese podem ser compostos de agarose ou de poliacrilamida, tendo cada uma delas atributos particulares úteis em diferentes situações. A agarose é um polissacarídeo extraído de algas marinhas. É normalmente usada em concentrações entre 0,5 e 2%. Quanto maior for à concentração de agarose, mais rígido é o gel. Géis de agarose tem uma faixa de separação bastante ampla, mas baixo poder de resolução. Por meio da variação de concentração de agarose, fragmentos de DNA de 200 a 50.0 pares de bases podem ser separados usando procedimentos simples (TREVILATTO & WERNECK, 2014). A eletroforese normalmente é utilizada para separar moléculas de DNA, RNA, e proteínas. Para DNA, inicialmente no processo é necessário que o DNA do organismo em estudo seja quebrado em pedaços que possam migrar na eletroforese, isto pode ser feito mecanicamente (por nebulização) ou com uso de enzimas de restrição). Os fragmentos de DNA, por serem normalmente negativos, irão correr para o polo positivo. O resultado será sempre um conjunto muito grande de fragmentos com tamanhos diferentes, que formarão uma faixa borrada no gel, quando tentarmos verificar o resultado da corrida eletroforética. (MARTINEZ, E.R.M; PAIVA, L.R.S.)
3.Objetivos O Objetivo geral foi preparar um gel de agarose a 1% e realizar a eletroforese utilizando um padrão de peso molecular para o DNA. E logo após a visualização das bandas no gel de agarose. Visualizar o DNA da saliva humana que foi extraído na aula anterior. 4.Materiais e Métodos: 4.1.Materiais: Balança; Papel Alumínio; Agarose; Micro-ondas; Cuba de eletroforese; Micropipetas; Ponteiras; Luvas; Fita adesiva; Brometo de etidio;10 ul de amostra de DNA; 2 ul de Looadying buffer (tampão de carregamento ou tampão de amostra) 6x; TBE 1x 4.2.Métodos: A atividade foi realizada no Laboratório de Genética, no dia 18 de Julho de 2019. Foi pesado 0,8 g de agarose em um erlenmeyer de 250 ml, e adicionado 80 ml de TBE 1x. Logo em seguida, o erlenmeyer foi levado ao micro-ondas e aquecido até que a agarose fosse dissolvida completamente. As amostras foram preparadas por alunos e os materiais que foram utilizados foram: 10 ul de DNA da mucosa bucal, juntamente com o tampão de carregamento que é o Looadying buffer que vai auxiliar na corrida do gel, já que ele se agrega na molécula de DNA fazendo com que ele corra mais facilmente no gel de agarose. Foi preparado o suporte para polimerização do gel que no caso era a própria cuba eletroforética. Após a solução de agarose esfriar foi adicionado 2 ul de brometo de etidio, logo em seguida, foi adicionada à solução 1% de agarose e brometo de etidio na cuba previamente preparada e aguardar a polimerização do gel. Após a polimerização foi retirado o pente e adicionado o TBE 1x até que o gel estivesse totalmente submerso na solução tampão. Foram pipetadas 13 amostras de DNA nos poços juntamente com o ladder, totalizando 14 poços no gel. Depois a cuba foi ligada e as amostras correram durante 1 hora. Como será mostrado na imagem abaixo. A minha amostra era a amostra 2. 5.Resultados e Discussões: